杜氏鹽藻（Dunaliella salina）MAR序列結(jié)合蛋白基因cDNA全長的克隆及序列分析.pdf

1、鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文杜氏鹽藻（Dunaliellasalina）MAR序列結(jié)合蛋白基因cDNA全長的克隆及序列分析姓名：王亞峰申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：藥理學(xué)指導(dǎo)教師：薛樂勛20060501鄭州大學(xué)2006年碩士學(xué)位論文(摘要)杜氏鹽藻MAR序列結(jié)合蛋白基因cDNA全長的克隆墾J量型坌塑12杜氏鹽藻MAR序列結(jié)合蛋白基因片段的克隆根據(jù)豌豆、煙草、擬南芥、酵母、人等真核生物的M脹序列結(jié)合蛋白基因的氨基酸保守序列設(shè)計簡并引物。以杜氏鹽藻總砒叮

2、A為模板，用MMuLⅣ反轉(zhuǎn)錄酶合成cDNA第一鏈，再以此為模板，PcR擴(kuò)增MAR序列結(jié)合蛋白基因的cDNA片段。RTPcR產(chǎn)物利用TA克隆方法，亞克隆到載體pMDl8一T上，并測序。13杜氏鹽藻MAR序列結(jié)合蛋白基因片段的序列分析測序結(jié)果與GeIlBallk上其他物種的MAR序列結(jié)合蛋白基因序列進(jìn)行比對分析，并用BLAsT進(jìn)行同源性分析。2結(jié)果21杜氏鹽藻總RNA的制備用TⅪzol試劑提取鹽藻總RNA，提取的鹽藻總RNA28s和18s兩

3、條帶很清楚，純度較高。22杜氏鹽藻MAR序列結(jié)合蛋白基因片段的克隆測序分析表明，RT_PCR得到的cDNA片段長為474個核苷酸，由其推導(dǎo)的氨基酸序列包含158個氨基酸殘基。2_3杜氏鹽藻MAR序列結(jié)合蛋白基因片段的序列分析經(jīng)BLAsT分析證明，與數(shù)據(jù)庫中其他物種的MAR序列結(jié)合蛋白基因的氨基酸序列有很高的同源性，其中與擬南芥的MAR序列結(jié)合蛋白基因的氨基酸序列同源性為73％，說明所得的序列是杜氏鹽藻的MAR序列結(jié)合蛋白基因的部分cDN

4、A序列。二、杜氏鹽藻MAR序列結(jié)合蛋白基因全長的克隆及序列分析1方法115’RAcE的方法擴(kuò)增杜氏鹽藻MAR序列結(jié)合蛋白基因5’上游cDNA片段及序列分析根據(jù)上述簡并引物擴(kuò)增出的杜氏鹽藻MAR序列結(jié)合蛋白基因部分cDNA片段，利用5’RACE的方法向5’上游擴(kuò)增杜氏鹽藻MAR序列結(jié)合蛋白基因cDNA片段。得到了杜氏鹽藻MAR序列結(jié)合蛋白基因cDNA5’端全部序列。所擴(kuò)增的cDl呵A片段插入pMDl8T載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌JMl09，經(jīng)氨芐