云南蘿芙木異胡豆苷合成酶基因的全長cDNA克隆與序列分析.pdf

1、云南蘿芙木是一種重要的藥用植物，其中含有多種萜類吲哚生物堿(terpenoid indole alkaloids，TIAs)，是治療高血壓、性功能障礙和癌癥等疾病的原料藥。異胡豆苷合成酶催化色胺和裂環(huán)馬錢子菅縮合生成TIAs的共同前體物質(zhì)3α(S)－異胡豆苷。它是云南蘿芙木萜類吲哚生物堿次生代謝的合成途徑中重要的限速酶?，F(xiàn)在尚未見從云南蘿芙木中克隆該基因的報(bào)道，因此研究云南蘿芙木STR基因?qū)τ谔岣逿IAs產(chǎn)量有指導(dǎo)意義。本論文主要研究結(jié)

2、果如下：
　　 1)云南蘿芙木STR基因的全長cDNA克隆。以云南蘿芙木新鮮葉片為材料提取RNA，將其反轉(zhuǎn)錄的cDNA作為模板，根據(jù)NCBI上已有的蘿芙木種中STR的核苷酸序列片段，用專業(yè)軟件Primer Premier5.0設(shè)計(jì)特異引物，通過PCR擴(kuò)增出STR基因，克隆產(chǎn)物經(jīng)過插入pMD18-T載體，以及轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α菌株等一系列操作之后送至生物公司測序，克隆片斷測序結(jié)果通過DNAMAN等生物信息學(xué)軟件的分析，獲得了10

3、38bp的STR基因的全長cDNA序列。
　　 2)云南蘿芙木STR的生物信息學(xué)分析。通過生物信息學(xué)軟件DNAMAN對測序結(jié)果進(jìn)行分析：STR基因cDNA長度1038p，含有一個(gè)1037bp的ORF，編碼345個(gè)氨基酸。在GenBank序列BLAST比對獲知STR與同種屬蛇根木的STR蛋白序列相似性分別達(dá)到99％，與同科的長春花STR序列相似性達(dá)80％。根據(jù)STR基因的cDNA序列推導(dǎo)出蛋白質(zhì)的氨基酸序列，應(yīng)用一系列生物信息學(xué)軟