廣州地區(qū)HIV-AIDS患者合并感染分枝桿菌的菌種分布及耐藥分析.pdf

1、研究背景:分枝桿菌分為結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群（MTC）、非結(jié)核分枝桿菌(NTM)、麻風(fēng)分枝桿菌。分枝桿菌感染是HIV/AIDS患者最常見(jiàn)的機(jī)會(huì)性感染之一。隨著HIV/AIDS在全球的蔓延，HIV/AIDS合并結(jié)核分枝桿菌和非結(jié)核分枝桿菌感染的發(fā)病率迅速上升。全球3530萬(wàn)HIV感染者中至少1/3有結(jié)核潛伏感染,結(jié)核與HIV共感染的患者比不合并HIV感染者可能發(fā)展為活動(dòng)性結(jié)核病的幾率大29.6（27.1-32.1）倍，結(jié)核病是導(dǎo)致HIV感染者

2、死亡的主要原因，占HIV相關(guān)死亡的1/5。NTM是重要的條件致病分枝桿菌，迄今為止已發(fā)現(xiàn)150余種NTM,已證實(shí)超過(guò)50多種的NTM對(duì)人類具有致病性，而且致病性菌種的數(shù)量正在不斷增加。NTM在HIV感染者中的發(fā)病率與流行高于不合并HIV感染者，艾滋病在全球流行后，NTM感染的流行情況發(fā)生了根本性的改變,NTM感染的發(fā)病率迅速上升,在歐美有高達(dá)25％~50%的艾滋病患者合并NTM感染。NTM病與結(jié)核病有著相似的臨床表現(xiàn)與體征，且抗酸染色涂

3、片也呈陽(yáng)性，易誤診為結(jié)核病。艾滋病合并分枝桿菌感染發(fā)生的種類、頻率隨著各國(guó)、各地區(qū)的社會(huì)經(jīng)濟(jì)文化、環(huán)境不同，存在區(qū)域性差異，各地分枝桿菌感染譜也不一樣。不同菌種的分枝桿菌在臨床治療和耐藥情況方面也有差異。因此，對(duì)HIV/AIDS合并感染的分枝桿菌菌種進(jìn)行快速、準(zhǔn)確地鑒定，探討其菌種分布特征，對(duì)臨床診斷和治療具有重要的意義。
　　HIV/AIDS患者合并感染的結(jié)核分枝桿菌對(duì)抗結(jié)核藥物的耐藥率明顯高于HIV陰性者，其中以耐INH和RF

4、P最為嚴(yán)重。AIDS合并的結(jié)核病不僅僅是對(duì)單一抗結(jié)核藥物的耐藥率增高,多重耐藥結(jié)核（MDR-TB）和廣泛耐藥結(jié)核（XDR-TB）的情況也十分嚴(yán)重。美國(guó)的一項(xiàng)研究指出，HIV/AIDS患者較HIV陰性者發(fā)生耐多藥結(jié)核病的危險(xiǎn)性明顯增高，前者高達(dá)19%，后者僅6%。NTM細(xì)胞表面疏水性高，其細(xì)胞壁是阻止抗結(jié)核藥物進(jìn)入細(xì)胞的屏障，因此，除海分枝桿菌和堪薩斯分枝桿菌外，大多數(shù)NTM對(duì)常用的一線抗結(jié)核藥呈高度耐藥，用常規(guī)抗結(jié)核治療療效不佳。HIV

5、/AIDS患者合并感染的NTM對(duì)二線抗結(jié)核藥的耐藥情況分析也鮮少見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道，缺乏系統(tǒng)性的分析。
　　研究目的及意義:廣州地區(qū)是全國(guó)HIV高流行的地區(qū)之一，近年來(lái)HIV/AIDS合并分枝桿菌感染的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，傳統(tǒng)的分枝桿菌檢測(cè)方法操作繁瑣且培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，由于缺乏有效的菌種鑒定手段，臨床上常予以抗結(jié)核治療性診斷，因而易將NTM感染誤診為耐藥結(jié)核。因此，開(kāi)發(fā)快速準(zhǔn)確的分枝桿菌檢測(cè)和菌種鑒定技術(shù)，建立HIV/AIDS患者合并感染分枝

6、桿菌耐藥監(jiān)測(cè)系統(tǒng)是目前亟待解決的問(wèn)題。
　　本研究采用多基因序列聯(lián)合分析的方法對(duì)廣州地區(qū)HIV/AIDS患者與非HIV感染者感染的分枝桿菌進(jìn)行菌種鑒定，通過(guò)比較兩個(gè)人群菌種分布差異，了解廣州地區(qū)HIV/AIDS患者合并感染分枝桿菌菌種分布特征，并在明確菌種類型的基礎(chǔ)上，采用以羅氏培養(yǎng)基為基礎(chǔ)的比例法，對(duì)HIV/AIDS患者合并感染分枝桿菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，了解廣州地區(qū)HIV/AIDS患者合并感染分枝桿菌的初始表型耐藥特征。本研究有助于

7、促進(jìn)HIV/AIDS合并分枝桿菌感染的早期診斷與治療，有助于促進(jìn)HIV/AIDS合并感染分枝桿菌耐藥監(jiān)測(cè)系統(tǒng)的建立，有助于監(jiān)測(cè)HIV陽(yáng)性人群分枝桿菌病原學(xué)及流行病學(xué)趨勢(shì)，為臨床治療提供有效的依據(jù)。
　　研究方法:
　　1.以2009~2013年133株分離自HIV/AIDS患者的分枝桿菌為研究對(duì)象，以150株分離自非HIV感染者的分枝桿菌為對(duì)照，提取分離株基因組DNA，PCR分別擴(kuò)增hsp65、16S-rDNA、16S-23

8、S-rDNA ITS基因，PCR產(chǎn)物測(cè)序后經(jīng)序列分析比對(duì)鑒定菌株，分析比較HIV/AIDS患者與非HIV感染者兩個(gè)人群分枝桿菌感染菌種分布差異及HIV/AIDS患者相關(guān)臨床資料。
　　2.根據(jù)菌種鑒定結(jié)果，隨機(jī)選取40株MTC和38株NTM，采用以羅氏培養(yǎng)基為基礎(chǔ)的比例法，對(duì)于目前臨床應(yīng)用的一線和二線抗結(jié)核藥物進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)。
　　研究結(jié)果:
　　1.133株HIV/AIDS患者感染分枝桿菌中，結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群8

9、2株（61.65%），非結(jié)核分枝桿菌51株（38.35%），非結(jié)核分枝桿菌主要為鳥(niǎo)分枝桿菌（15株）、鳥(niǎo)分枝桿菌復(fù)合群（9株）、堪薩斯分枝桿菌（7株）。
　　2.150株來(lái)自非HIV感染者分枝桿菌中，結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群126株（84.0%），非結(jié)核分枝桿菌24株（16.0%），非結(jié)核分枝桿菌主要為膿腫分枝桿菌（9株）、馬西利亞分枝桿菌（4株）、鳥(niǎo)分枝桿菌(4株)。
　　3.78株(58.65%)分枝桿菌來(lái)自CD4≤50個(gè)/μ

10、l的HIV/AIDS患者；74.19%的MAC及75%的其他NTM感染發(fā)生在CD4≤50個(gè)/μl水平。
　　4.40株MTC藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示：MTC對(duì)10種抗結(jié)核藥總耐藥率為25%（10/40）,一線藥耐藥率為10.0%(4/40),二線藥耐藥率為20.0%(8/40)，其中，對(duì)EMB、AM、RBU、力克肺疾4藥全敏感。其余6種藥的耐藥率從高到低依次為：TH1321（12.5%）、LFX（12.5%）、RFP（10.0%）、INH

11、（5.0%）、SM（5.0%）、MFX（2.5%）
　　5.38株NTM藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示：NTM對(duì)對(duì)氨基水楊酸異煙肼（力克肺疾，Pa）耐藥率最高，為94.7%，其他依次為阿米卡星（AK）（84.2%）、鏈霉素(SM)（84.2%）、異煙肼(INH)(81.6%)、左氧氟沙星(LFX)(71.1%)、克拉霉素(CLA)(65.8%)、利福平(RFP)（65.8%）、莫西沙星(MFX)(42.1%)，而對(duì)丙硫異煙胺(TH1321)、乙

12、胺丁醇(EMB)、利福布汀(RBD)較為敏感，敏感率依次為94.7%、82.1%、73.7%。
　　結(jié)論:
　　1.廣州地區(qū)HIV/AIDS患者感染非結(jié)核分枝桿菌比例顯著高于非HIV感染者且菌種更為多樣，HIV/AIDS患者感染非結(jié)核分枝桿菌以鳥(niǎo)分枝桿菌為主而非HIV感染者以膿腫分枝桿菌為主
　　2. HIV/AIDS患者合并分枝桿菌感染率隨著CD4+水平的降低而升高，NTM感染主要發(fā)生于CD4≤50個(gè)/μl患者。