耐藥結(jié)核分枝桿菌差異蛋白的比較及功能分析.pdf

1、目的：將廣泛耐藥結(jié)核分枝桿菌臨床分離株的菌體蛋白分別與耐多藥結(jié)核分枝桿菌臨床分離株和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)菌株H37Rv的菌體蛋白表達(dá)進(jìn)行比較，對(duì)差異表達(dá)蛋白質(zhì)分類分析，以尋找廣泛耐藥相關(guān)的差異蛋白質(zhì)，進(jìn)一步了解結(jié)核分枝桿菌耐藥機(jī)制。
　　 方法：通過雙向凝膠電泳技術(shù)分離廣泛耐藥菌株(1株)、耐多藥菌株(1株)和H37Rv菌株菌體總蛋白，將廣泛耐藥菌株蛋白表達(dá)圖譜與其他兩株比較，選取差異表達(dá)蛋白點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定。肽序列和肽指紋圖譜在生物信息數(shù)

2、據(jù)庫中檢索，在NCBI及PIR等數(shù)據(jù)庫中查找蛋白質(zhì)信息，并按照蛋白質(zhì)功能進(jìn)行歸納分析。選取部分差異蛋白點(diǎn)，對(duì)其轉(zhuǎn)錄基因設(shè)計(jì)引物，用qPCR技術(shù)在基因水平檢測(cè)其在廣泛耐藥臨床分離菌株(5株)、耐多藥臨床分離菌株(5株)、全敏感臨床分離菌株(5株)間的表達(dá)差異，PCR產(chǎn)物測(cè)序驗(yàn)證。
　　 結(jié)果：廣泛耐藥結(jié)核菌株蛋白表達(dá)圖譜與耐多藥菌株和H37Rv菌株表達(dá)圖譜均存在差異，相對(duì)于H37Rv有較多差異蛋白點(diǎn)，其中以缺失及下調(diào)蛋白點(diǎn)居多。以

3、表達(dá)差異超過3倍為標(biāo)準(zhǔn)，切取104個(gè)差異蛋白點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜分析，共得到74個(gè)蛋白的肽指紋圖譜信息。廣泛耐藥菌株相對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)菌株有大量氧化還原酶類蛋白表達(dá)減低。在基因水平上核實(shí)了在全敏感菌株、耐多藥菌株和廣泛耐藥菌株中表達(dá)依次增高的2個(gè)蛋白以及表達(dá)依次減低的1個(gè)蛋白。
　　 結(jié)論：蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)可對(duì)廣泛耐藥結(jié)核分枝桿菌臨床分離株的差異蛋白點(diǎn)有效分離?；蛩缴虾藢?shí)差異表達(dá)的3個(gè)蛋白或有可能成為廣泛耐藥菌株的生物標(biāo)記和抗結(jié)核新藥研發(fā)的潛在