耐藥結核分枝桿菌差異蛋白的比較及功能分析.pdf

1、目的：將廣泛耐藥結核分枝桿菌臨床分離株的菌體蛋白分別與耐多藥結核分枝桿菌臨床分離株和實驗室標準菌株H37Rv的菌體蛋白表達進行比較，對差異表達蛋白質分類分析，以尋找廣泛耐藥相關的差異蛋白質，進一步了解結核分枝桿菌耐藥機制。
　　 方法：通過雙向凝膠電泳技術分離廣泛耐藥菌株(1株)、耐多藥菌株(1株)和H37Rv菌株菌體總蛋白，將廣泛耐藥菌株蛋白表達圖譜與其他兩株比較，選取差異表達蛋白點進行質譜鑒定。肽序列和肽指紋圖譜在生物信息數(shù)

2、據(jù)庫中檢索，在NCBI及PIR等數(shù)據(jù)庫中查找蛋白質信息，并按照蛋白質功能進行歸納分析。選取部分差異蛋白點，對其轉錄基因設計引物，用qPCR技術在基因水平檢測其在廣泛耐藥臨床分離菌株(5株)、耐多藥臨床分離菌株(5株)、全敏感臨床分離菌株(5株)間的表達差異，PCR產(chǎn)物測序驗證。
　　 結果：廣泛耐藥結核菌株蛋白表達圖譜與耐多藥菌株和H37Rv菌株表達圖譜均存在差異，相對于H37Rv有較多差異蛋白點，其中以缺失及下調蛋白點居多。以

3、表達差異超過3倍為標準，切取104個差異蛋白點進行質譜分析，共得到74個蛋白的肽指紋圖譜信息。廣泛耐藥菌株相對于標準菌株有大量氧化還原酶類蛋白表達減低。在基因水平上核實了在全敏感菌株、耐多藥菌株和廣泛耐藥菌株中表達依次增高的2個蛋白以及表達依次減低的1個蛋白。
　　 結論：蛋白質組學技術可對廣泛耐藥結核分枝桿菌臨床分離株的差異蛋白點有效分離?；蛩缴虾藢嵅町惐磉_的3個蛋白或有可能成為廣泛耐藥菌株的生物標記和抗結核新藥研發(fā)的潛在