奶牛生殖系統(tǒng)內(nèi)的朊蛋白與朊病垂直傳播的組織相關(guān)性研究.pdf

1、上世紀(jì)80年代瘋牛病在歐洲暴發(fā)，對(duì)全球經(jīng)濟(jì)造成很大的損失，更為嚴(yán)重的是它能通過食物鏈傳染給人，造成人的新型克雅氏病(nvCJD)。在該類疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中，PrP<'Sc>作為模板誘導(dǎo)正常分子PrP<'c>發(fā)生構(gòu)象改變，產(chǎn)生大量具有蛋白酶抗性的PrP<'Sc>并在中樞神經(jīng)系統(tǒng)聚集而發(fā)病。目前人們發(fā)現(xiàn)TSE可以水平傳播，但人們對(duì)于TSE是否能垂直傳播仍未定論。生殖系統(tǒng)與垂直傳播有密切關(guān)系，研究生殖系統(tǒng)中細(xì)胞型朊蛋白的表達(dá)對(duì)于探討TSE

2、能否通過生殖系統(tǒng)而垂直傳播具有重要的意義。研究內(nèi)容如下： 1.用實(shí)時(shí)定量RT-PCR對(duì)PrP<'c>在生殖系統(tǒng)不同組織中的表達(dá)進(jìn)行檢測，我們采用GAPDH基因做內(nèi)參照基因的相對(duì)熒光定量RT-PCR方法，對(duì)目的基因和內(nèi)參基因分別構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)重組質(zhì)粒，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)采集雌雄奶牛生殖系統(tǒng)的12個(gè)不同組織PrP基因表達(dá)進(jìn)行定量。試驗(yàn)結(jié)果表明奶牛的雌性生殖系統(tǒng)和雄性生殖系統(tǒng)的各組織均有PrP基因表達(dá)，其中雄性奶牛的睪丸、附睪和輸

3、精管呈現(xiàn)高表達(dá)，分別為1.16±0.0010、1.81±0.0056、0.68±0.0038；前列腺，精囊腺和尿道球腺呈現(xiàn)中等表達(dá)，分別為0.47±0.0018、0.25±0.0007、0.28±0.0007；陰莖呈現(xiàn)低表達(dá)，為0.18±0.0017；雌性奶牛的子宮、子宮阜呈現(xiàn)高表達(dá)，分別為2.53±0.0008、1.75±0.0098；卵巢和輸卵管呈現(xiàn)中等表達(dá)，分別為1.55±0.0038、1.45±0.0064；陰道呈現(xiàn)低表達(dá)，為0

4、.57±0.0036。本研究為闡釋PrP基因在奶牛生殖系統(tǒng)的正常表達(dá)，為研究瘋牛病是否可以通過生殖系統(tǒng)垂直傳播的奠定理論基礎(chǔ)。 2.用免疫組織化學(xué)的方法對(duì)奶牛生殖系統(tǒng)中朊蛋白進(jìn)行定位研究，結(jié)果表明：在雌性奶牛的卵巢、子宮阜和子宮呈現(xiàn)陽性，輸卵管呈弱陽性。雄性奶牛的睪丸、附睪呈現(xiàn)弱陽性，其他器官均為陰性。這說明了在這些組織中有正常的PrP的存在，為探索Prion致病機(jī)理、感染途徑提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，也為朊病毒是否可以垂直傳播提供了基礎(chǔ)數(shù)