乙型肝炎病毒經(jīng)生殖細胞垂直傳播的實驗研究.pdf

1、目的：檢測乙型肝炎病毒表面抗原(hepatitis B surface antigen，HBsAg)陽性卵巢腫瘤患者卵巢組織中乙型肝炎病毒(hepatitis B virusHBV)DNA，探討HBV可以感染人類卵巢組織細胞，為HBV感染經(jīng)生殖細胞垂直傳遞提供實驗依據(jù)；構建攜帶乙型肝炎病毒表面抗原基因(HBV S)的真核表達載體，轉染肝癌細胞HepG2，檢測構建載體及HBV S基因在肝癌細胞中的表達。 方法：應用聚合酶鏈反應(p

2、olymerase chain reaction，PCR)、熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH)和逆轉錄聚合酶鏈反應(reversetranscription PCR，RT-PcR)等分子遺傳學技術檢測卵巢腫瘤患者卵巢組織細胞中HBV DNA、構建重組載體、轉染肝癌細胞和檢測目的基因表達。 結果： ①PCR、FISH檢測結果發(fā)現(xiàn)，HBsAg陽性卵巢腫瘤患者卵巢組織

3、細胞存在HBV DNA，與對照組HBsAg陰性卵巢腫瘤患者卵巢石蠟組織細胞中的檢測結果比較，實驗結果差異高度顯著，P<0.01； ②以質粒pBR322-HBV為模板，PCR擴增出3.2kb全長HBV DNA及700 bp的HBV S基因； ③成功構建載體pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO-HBS；④RT-PCR檢測載體轉染HepG2細胞表達HBV SmRNA。 結論： ①HBV可以感染卵巢組織細胞，