馬麝朊蛋白基因的克隆與原核表達(dá).pdf_第1頁(yè)
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1、目的為了解馬麝朊蛋白基因結(jié)構(gòu)特征和其細(xì)胞型朊蛋白的性質(zhì),以填補(bǔ)國(guó)內(nèi)外對(duì)馬麝朊蛋白基因研究的空白,并為進(jìn)一步研究馬麝朊蛋白結(jié)構(gòu)特征和動(dòng)物朊病毒病傳染的種間屏障機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)材料和理論依據(jù),本研究準(zhǔn)備對(duì)馬麝朊蛋白基因進(jìn)行克隆及其原核表達(dá).結(jié)果序列分析表明,4個(gè)馬麝朊蛋白基因的完整編碼區(qū)均為包含在單一外顯子內(nèi)完整開放閱讀框,其全長(zhǎng)為771bp,含5個(gè)短而富含G-C的元件,可編碼5個(gè)八肽(九肽)重復(fù)Pro-His-Gly-Gly-Gly-Trp-

2、Gly-Gln或Pro-Gln/His-Gly-Ala/Gly-Gly-Gly-Trp-Gly-Gln及24個(gè)氨基酸的N-端信號(hào)肽和23個(gè)氨基酸的C-端信號(hào)肽.所構(gòu)建的馬麝重組朊蛋白(85~233)原核表達(dá)載體pGEX-MuPrP(85~233),經(jīng)轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3),成功地獲得重組表達(dá)菌E.coli GST-MuPrP(85~233),可表達(dá)預(yù)期大小約為42.4 ku的融合蛋白.在誘導(dǎo)表達(dá)優(yōu)化條件下,該重組菌可產(chǎn)生表

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