豆類絲核菌次級(jí)代謝產(chǎn)物的致畸作用及行為畸胎學(xué)研究.pdf

1、目的：傳代并保存豆類絲核菌菌株，制備豆類絲核菌94-2A株次級(jí)代謝產(chǎn)物，利用傳統(tǒng)致畸試驗(yàn)檢測其是否對(duì)小白鼠產(chǎn)生致畸作用，并進(jìn)一步利用行為畸胎學(xué)試驗(yàn)研究其是否對(duì)小白鼠后代行為學(xué)產(chǎn)生致畸作用。綜合以上研究結(jié)果對(duì)豆類絲核菌次級(jí)代謝產(chǎn)物的安全性做出初步評(píng)價(jià)，為其作為一種新型的抗腫瘤藥物應(yīng)用于臨床奠定理論基礎(chǔ)。 方法：(1)用馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基對(duì)豆類絲核菌菌種進(jìn)行傳代與保存。(2)將豆類絲核菌94-2A株接種于改良Czape

2、k's培養(yǎng)基中25℃恒溫培養(yǎng)14d，獲取其次級(jí)代謝產(chǎn)物。(3)根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)，并結(jié)合前人經(jīng)驗(yàn)，利用傳統(tǒng)致畸試驗(yàn)對(duì)豆類絲核菌94-2A株次級(jí)代謝產(chǎn)物進(jìn)行致畸作用檢測，自妊娠第6d起連續(xù)經(jīng)口灌胃給藥10d，灌胃量均為0.2ml/20g體重，每3d稱重一次，調(diào)整灌胃量。于妊娠第20d脫頸處死孕鼠，剖腹取出子宮。觀察記錄每只孕鼠的胚胎植入數(shù)、活胎數(shù)、死胎數(shù)、吸收胎數(shù)及胎鼠發(fā)育情況，每只胎鼠分別測體重、體長、尾長、性別，檢查外觀畸形，然后每窩胎鼠取

3、1/2用茜素紅染色做骨骼畸形檢查，余1/2胎鼠固定于Bouins液中作內(nèi)臟畸形檢查。根據(jù)其對(duì)小白鼠母體毒性、胎鼠外觀、內(nèi)臟、骨骼畸形數(shù)據(jù)，對(duì)其致畸作用做出綜合評(píng)價(jià)。(4)利用行為畸胎學(xué)試驗(yàn)，自妊娠第6d起連續(xù)經(jīng)口灌胃給藥10d，灌胃量均為0.2ml/20g體重，每3d稱重一次，調(diào)整灌胃量。孕鼠自然分娩，記錄每窩仔鼠數(shù)。出生后第4d記錄仔鼠4d存活率，并將各窩仔鼠數(shù)調(diào)整至6只，不足6只的母鼠予以淘汰，檢測仔鼠生長發(fā)育、行為狀態(tài)等各項(xiàng)指標(biāo)，

4、第28d仔鼠雌雄分籠飼養(yǎng)。通過對(duì)小白鼠后代生長發(fā)育、反射及協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)能力、學(xué)習(xí)記憶能力、自主運(yùn)動(dòng)能力各方面數(shù)據(jù)的綜合分析，對(duì)其行為致畸作用做出評(píng)價(jià)。 結(jié)果：(1)對(duì)實(shí)驗(yàn)室保存菌種進(jìn)行傳代保存，每三個(gè)月傳代一次。(2)豆類絲核菌94-2A株次級(jí)代謝產(chǎn)物培養(yǎng)液為深黃色，較清亮，懸浮物質(zhì)少。(3)采用豆類絲核菌次級(jí)代謝產(chǎn)物半數(shù)致死量(LD<,50>)226.46mg/kg(95％置信區(qū)間158.49～323.59mg/kg)的1/4、1

5、/16、1/64作為實(shí)驗(yàn)劑量對(duì)昆明種小白鼠進(jìn)行致畸作用實(shí)驗(yàn)研究，分別為抗腫瘤最大有效治療劑量的3.50倍、0.86倍、0.22倍，最小有效治療劑量的20.97倍、5.24倍、1.31倍。傳統(tǒng)致畸試驗(yàn)結(jié)果顯示，豆類絲核菌次級(jí)代謝產(chǎn)物除了高劑量組孕鼠在晚期出現(xiàn)體重增重減慢之外，其余指標(biāo)與生理鹽水組相比差異均不顯著(P>0.05)，而三個(gè)劑量組在胎鼠死胎率、吸收胎率、外觀畸形率、骨骼畸形率、內(nèi)臟畸形率各方面與陽性對(duì)照組相比差異均極顯著(P<0

6、.01)。(4)在行為致畸試驗(yàn)中，豆類絲核菌次級(jí)代謝產(chǎn)物高、中、低三個(gè)劑量組小鼠無論在母鼠妊娠、仔鼠體格發(fā)育、仔鼠反射、仔鼠協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)能力、仔鼠記憶能力及自主活動(dòng)能力方面與空白對(duì)照組相比均差異不顯著(P>0.05)，而與陽性對(duì)照組相比除每窩平均產(chǎn)仔數(shù)、曠場實(shí)驗(yàn)洗臉次數(shù)、排糞次數(shù)外，其他各項(xiàng)指標(biāo)均差異極顯著(P<0.01)。 結(jié)論：結(jié)合傳統(tǒng)致畸試驗(yàn)和行為致畸試驗(yàn)結(jié)果表明，在本實(shí)驗(yàn)劑量和條件下，豆類絲核菌次級(jí)代謝產(chǎn)物對(duì)小鼠母體無明顯毒