豆類絲核菌次級代謝產物對阿霉素毒性的保護作用及其聯(lián)合抗腫瘤作用研究.pdf

1、目的：復制阿霉素(adriamycin，ADR)誘導小白鼠骨髓抑制及心肌損傷模型，為探索豆類絲核菌次級代謝產物對其毒性的保護作用提供動物模型；通過血常規(guī)、心電圖、生化指標、病理學觀察等方面研究該代謝產物對損傷動物的保護作用；探索兩者聯(lián)合應用的體內外抗腫瘤作用，為該代謝產物在抗腫瘤方面的應用提供新的思路。 方法：①分別給小白鼠腹腔注射2mg-kg<'-1>、4mg·kg<'-1>、6mg·kg<'-1>的ADR，隔日一次，共五次，

2、或一次腹腔注射ADR20mg·kg<'-1>，建立能夠造成動物骨髓抑制及心肌損傷的方法。②給小白鼠注射阿霉素的同時灌胃豆類絲核菌次級代謝產物，其苦馬豆素(Swainsonine，SW)含量分別為8mg·kg<'-1>、16mg·kg<'-1>、32mg·kg<'-1>，末次用藥24h后檢查小鼠血常規(guī)；描記心電圖；測定血清肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(L,DH)活力，心肌超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量；并對心肌進行病理

3、組織學觀察，探索豆類絲核菌次級代謝產物對阿霉素所致小鼠骨髓抑制及心肌損傷的保護作用并確定保護劑量。③建立移植性肉瘤S<,180>動物模型，隨機分為四組，對照組(Ⅰ組，生理鹽水組)、代謝產物組(Ⅱ組，SW16 mg.kg<'-1>)、ADR組(Ⅲ組，ADR2.5mg·kg<'-1>)、聯(lián)合用藥組(Ⅳ組，SWl6 mg.kg<'-1>+ADR2.5mg.kg<'-1>)，末次用藥48h后計算腫瘤抑制率、小鼠脾指數(shù)、測定荷瘤小鼠T淋巴細胞活化

4、指數(shù)、腹腔巨噬細胞吞噬功能，并剖檢動物，取瘤組織與心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟進行病理組織學觀察。④以不同濃度的豆類絲核菌次級代謝產物稀釋液(10、5、2.5、1.25、0.62、0.31μg-ml<'-1>)作用于對數(shù)生長期的人肝癌細胞株HepG2，測定其72h后的IC<,50>。以該代謝產物的IC<,50>與阿霉素(60μg.ml<'-1>、6μg/ml)聯(lián)合作用于肝癌細胞，72h后，測細胞存活率。 結果：①ADR以4 mg

5、-kg<'-1>隔日腹腔注射5次可以造成小白鼠骨髓及心肌損傷。②豆類絲核菌次級代謝產物(SW含量為16mg-kg<'-1>、32mg.kg<'-1>)對ADR誘導的骨髓抑制和心肌損傷具有一定的保護作用，可抑制ADR.引起的白細胞數(shù)、紅細胞數(shù)、血紅蛋白量的減少：使心率加快，心電圖Q波振幅減小，QRS波時間縮短和S-T段回升；降低血清CK、LDH活力，增強心肌SOD活力，降低MDA含量，減輕心肌組織損傷。③在體內抑瘤實驗中，Ⅳ組抑瘤率最高(

6、達64％)，表明兩藥聯(lián)合具有相加作用；Ⅳ組小鼠的脾指數(shù)為38.97±4.03，高于Ⅲ組的24.90±1.43(p<0.01)，T淋巴細胞活化指數(shù)為1.22±0.03，高于Ⅲ組的1.12±0.04(p<0.05)，且瘤組織中壞死面積較大，證明SW一方面直接作用于瘤細胞，另一方面通過調節(jié)機體免疫水平發(fā)揮抗腫瘤作用。④體外實驗結果顯示，隨著豆類絲核菌次級代謝產物中SW含量的增加，肝癌細胞。HepG2的存活率下降，其作用72h的IC<,50>為

7、1.25μg.ml<'-1>；但將該代謝產物與ADR聯(lián)合作用于HepG2細胞，卻不具有相加作用，可能是由于SW對機體的免疫調節(jié)作用在抗腫瘤過程中發(fā)揮了較重要的作用。 結論：①ADR以4mg·kg<'-1>隔日腹腔注射共5次可以建立小白鼠骨髓抑制及心肌損傷模型；②豆類絲核菌次級代謝產物16mg·kg<'-1>、32mg·kg<'-1>(以SW含量計)對ADR造成的骨髓抑制及心肌損傷具有保護作用；③SW與ADR聯(lián)合使用對抑制小鼠移植