豆類絲核菌次級(jí)代謝產(chǎn)物對(duì)阿霉素毒性的保護(hù)作用及其聯(lián)合抗腫瘤作用研究.pdf

1、目的：復(fù)制阿霉素(adriamycin，ADR)誘導(dǎo)小白鼠骨髓抑制及心肌損傷模型，為探索豆類絲核菌次級(jí)代謝產(chǎn)物對(duì)其毒性的保護(hù)作用提供動(dòng)物模型；通過(guò)血常規(guī)、心電圖、生化指標(biāo)、病理學(xué)觀察等方面研究該代謝產(chǎn)物對(duì)損傷動(dòng)物的保護(hù)作用；探索兩者聯(lián)合應(yīng)用的體內(nèi)外抗腫瘤作用，為該代謝產(chǎn)物在抗腫瘤方面的應(yīng)用提供新的思路。 方法：①分別給小白鼠腹腔注射2mg-kg<'-1>、4mg·kg<'-1>、6mg·kg<'-1>的ADR，隔日一次，共五次，

2、或一次腹腔注射ADR20mg·kg<'-1>，建立能夠造成動(dòng)物骨髓抑制及心肌損傷的方法。②給小白鼠注射阿霉素的同時(shí)灌胃豆類絲核菌次級(jí)代謝產(chǎn)物，其苦馬豆素(Swainsonine，SW)含量分別為8mg·kg<'-1>、16mg·kg<'-1>、32mg·kg<'-1>，末次用藥24h后檢查小鼠血常規(guī)；描記心電圖；測(cè)定血清肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(L,DH)活力，心肌超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量；并對(duì)心肌進(jìn)行病理

3、組織學(xué)觀察，探索豆類絲核菌次級(jí)代謝產(chǎn)物對(duì)阿霉素所致小鼠骨髓抑制及心肌損傷的保護(hù)作用并確定保護(hù)劑量。③建立移植性肉瘤S<,180>動(dòng)物模型，隨機(jī)分為四組，對(duì)照組(Ⅰ組，生理鹽水組)、代謝產(chǎn)物組(Ⅱ組，SW16 mg.kg<'-1>)、ADR組(Ⅲ組，ADR2.5mg·kg<'-1>)、聯(lián)合用藥組(Ⅳ組，SWl6 mg.kg<'-1>+ADR2.5mg.kg<'-1>)，末次用藥48h后計(jì)算腫瘤抑制率、小鼠脾指數(shù)、測(cè)定荷瘤小鼠T淋巴細(xì)胞活化

4、指數(shù)、腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能，并剖檢動(dòng)物，取瘤組織與心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟進(jìn)行病理組織學(xué)觀察。④以不同濃度的豆類絲核菌次級(jí)代謝產(chǎn)物稀釋液(10、5、2.5、1.25、0.62、0.31μg-ml<'-1>)作用于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人肝癌細(xì)胞株HepG2，測(cè)定其72h后的IC<,50>。以該代謝產(chǎn)物的IC<,50>與阿霉素(60μg.ml<'-1>、6μg/ml)聯(lián)合作用于肝癌細(xì)胞，72h后，測(cè)細(xì)胞存活率。 結(jié)果：①ADR以4 mg

5、-kg<'-1>隔日腹腔注射5次可以造成小白鼠骨髓及心肌損傷。②豆類絲核菌次級(jí)代謝產(chǎn)物(SW含量為16mg-kg<'-1>、32mg.kg<'-1>)對(duì)ADR誘導(dǎo)的骨髓抑制和心肌損傷具有一定的保護(hù)作用，可抑制ADR.引起的白細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白量的減少：使心率加快，心電圖Q波振幅減小，QRS波時(shí)間縮短和S-T段回升；降低血清CK、LDH活力，增強(qiáng)心肌SOD活力，降低MDA含量，減輕心肌組織損傷。③在體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn)中，Ⅳ組抑瘤率最高(

6、達(dá)64％)，表明兩藥聯(lián)合具有相加作用；Ⅳ組小鼠的脾指數(shù)為38.97±4.03，高于Ⅲ組的24.90±1.43(p<0.01)，T淋巴細(xì)胞活化指數(shù)為1.22±0.03，高于Ⅲ組的1.12±0.04(p<0.05)，且瘤組織中壞死面積較大，證明SW一方面直接作用于瘤細(xì)胞，另一方面通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體免疫水平發(fā)揮抗腫瘤作用。④體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著豆類絲核菌次級(jí)代謝產(chǎn)物中SW含量的增加，肝癌細(xì)胞。HepG2的存活率下降，其作用72h的IC<,50>為

7、1.25μg.ml<'-1>；但將該代謝產(chǎn)物與ADR聯(lián)合作用于HepG2細(xì)胞，卻不具有相加作用，可能是由于SW對(duì)機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)作用在抗腫瘤過(guò)程中發(fā)揮了較重要的作用。 結(jié)論：①ADR以4mg·kg<'-1>隔日腹腔注射共5次可以建立小白鼠骨髓抑制及心肌損傷模型；②豆類絲核菌次級(jí)代謝產(chǎn)物16mg·kg<'-1>、32mg·kg<'-1>(以SW含量計(jì))對(duì)ADR造成的骨髓抑制及心肌損傷具有保護(hù)作用；③SW與ADR聯(lián)合使用對(duì)抑制小鼠移植