豆類絲核菌次級(jí)代謝產(chǎn)物的生物效應(yīng)研究.pdf

1、摘要三摘要目的:篩選出生長(zhǎng)穩(wěn)定，產(chǎn)生SW量大的優(yōu)良的豆類絲核菌菌株，為該菌進(jìn)行發(fā)酵動(dòng)力學(xué)研究奠定基礎(chǔ)，并獲得該菌在生長(zhǎng)及形態(tài)上的系統(tǒng)鑒定資料同時(shí)研究該菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物的抗腫瘤病理及免疫效應(yīng)，從而探索Sw的抗腫瘤應(yīng)用探索該菌或其次級(jí)代謝產(chǎn)物的動(dòng)植物損害在細(xì)胞生物學(xué)上的關(guān)系，從而為SW的毒理學(xué)研究及腫瘤病理學(xué)研究提供新的研究思路。方法:①通過野外分離和保存菌株復(fù)活純化方法。獲得生長(zhǎng)穩(wěn)定的豆類絲核菌，并進(jìn)通過光學(xué)顯微鏡和掃描電鏡進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定

2、，對(duì)不同菌株分別與標(biāo)準(zhǔn)菌和相互進(jìn)行菌絲融合試驗(yàn)。②將篩選分離的穩(wěn)定菌株用改良的Czapeks培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，獲得豆類絲核菌次級(jí)代謝產(chǎn)物，并通過氣相色譜法測(cè)定其苦馬豆素(SwainsonineSW)含量。③通過建立種植性肝癌(Hl)實(shí)體瘤動(dòng)物模型，并給荷瘤小鼠灌胃含有SW且劑量分別為2.7mgkgd(II組)和16.2mgkgd(111組)的豆類絲核菌次級(jí)代謝產(chǎn)物稀釋液，分別于不同時(shí)間測(cè)定荷瘤鼠T淋巴細(xì)胞活化指數(shù)(S工)、腫瘤抑制率和腹腔

3、巨噬細(xì)胞吞噬百分率和剖檢荷瘤動(dòng)物并取腫瘤組織與肝組織進(jìn)行病理組織學(xué)和電鏡觀察。④制作豆類絲核菌次級(jí)代謝產(chǎn)物污染的飼料和人工污染豆類絲核菌飼料，飼喂家免17d，剖檢家兔并取其腦、肝臟、腎臟等組織分別進(jìn)行病理組織學(xué)和電鏡觀察同時(shí)將不同濃度的次級(jí)代謝產(chǎn)物和不同株的豆類絲核菌分別污染回接的綠豆，待84h培養(yǎng)后。分別進(jìn)行組織學(xué)和電鏡觀察。結(jié)果與小結(jié):①獲得6株生長(zhǎng)穩(wěn)定的菌株，且6株菌屬于同一菌種的不同融合群，均具有豆類絲核菌的形態(tài)特征，屬于豆類絲

4、核菌，其產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物中含有大量的SW0268和023A代謝產(chǎn)生的Sw較高‘分別達(dá)到1093.17mgL‘和1199.64mg。Le②在抗腫瘤試驗(yàn)中，II組Si在Sd時(shí)顯著升高，明顯高于對(duì)照組(1組》的1.33310.053，達(dá)到1.670士0.527(P0.05)e111組荷瘤動(dòng)物腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率在灌藥后8d時(shí)也顯著高于腫瘤對(duì)照組(I組)的腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率(P0.05).達(dá)到33.99土1.56%.11、III兩組腫瘤抑制率8

5、d時(shí)分別為26.44%和33.91%16d時(shí)分別為46.98%和4724%.II組與III組在816d時(shí)腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)大量且嚴(yán)重的脂肪變性及大面積壞死，且壞死區(qū)呈網(wǎng)絡(luò)狀，將瘤組織分割成小的瘤細(xì)胞團(tuán).表明該次級(jí)代謝產(chǎn)物能夠使荷瘤動(dòng)物細(xì)胞免疫應(yīng)答增強(qiáng)，并能抑制種植性實(shí)體瘤(Hn)的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移其中含SWl6.2mgkgd劑It標(biāo)準(zhǔn)的次級(jí)代謝產(chǎn)物對(duì)荷瘤動(dòng)物的免疫增強(qiáng)作用與抗腫瘤作用明顯。③在對(duì)動(dòng)植物細(xì)胞損容作用中，豆類絲核菌次級(jí)代謝產(chǎn)物使家兔腦組

6、織和淋巴細(xì)胞豆類絲核菌次級(jí)代謝產(chǎn)物的生物效應(yīng)研究空泡變性，神經(jīng)細(xì)胞核糖體脫顆粒，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張等同時(shí)能使植物根部組織結(jié)構(gòu)受損，細(xì)胞空泡變性，內(nèi)膜破裂等。由此表明，豆類絲核菌引起的動(dòng)物中毒作用主要是其次級(jí)代謝產(chǎn)物中SW發(fā)揮毒性，且同瘋草中毒引起的病理變化基本一致:菌株對(duì)植物根部的致病性與其次級(jí)代謝產(chǎn)物中SW含量呈正相關(guān)。即推測(cè)，SW很有可能不僅是動(dòng)物豆類絲核菌中毒的主要毒素，而且是豆科植物絲核菌病中細(xì)胞損害的主要化學(xué)物質(zhì)。關(guān)鍵詞:豆類絲核

7、菌次級(jí)代謝產(chǎn)物苦馬豆素腫瘤:毒性TheStu即onbiologyEfectsofSecondaryMetabolitesofRhizoctoniaLeguminicolaPostgraduate:ZhangLiSupervisor:YangMingqi(CollegeofAnimalScienceandTechnologyNorthwestSciTechUniversityofAgricultureandForestryYangling

8、ShaanxiChinaP.R712100)AbstractJu句ect:Ytcxupstrainsofxmzociontaiegumiwcoiamatcanprouuctlargeamountsofswainsonine(SW)andgrowstably.ThisworkcanestablishthefoundationforzymologystudyonthestrainsofRhizoctonialeguminicola.Weca

9、nalsoacquirethesystemicidentificationdatumofthevegetalandmodalcharacterandstudytheantitumorefectsofpathologyandimmunologyinthebodyofanimalbythesecondarymetabolitesofRhizoctoniaLeguminicola.Therebywecouldknowthereasonofan

10、titumorbySW.AtlastwecouldexploredamageefectandcytobiologyrelationshipofanimalandplantcellbyRhizoctonialeguminicolaanditssecondarymetabolites.Allthesecanprovidenewthoughtfulnessforthestudyontumorpathologyandtoxicology.Met

11、hod:①BywayofstrainsseparationpurificationrevivalofthisepiphyteinfieldandtheRhizoctonialeguminicolahadbeenkeptinourlabsince1997respectivelywecouldgetsomestrainsofgrowthstablythenmodalcharacteridentificationhadbeenprocesse

12、dbyopticsmicroscopeandSEMandtheexperimentationofhyphaamalgamationhadbeendonetodistinguishdiferentamalgamationgroups②ThestablestrainswasculturedbyimprovedC7apeksculturemediumandthesecondarymetabolitesofRhizoctoniaLegumini