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1、本論文根據(jù)已知的人和小鼠Integrin αVβ3基因cDNA序列的保守區(qū)域設(shè)計(jì)了四對(duì)引物,擴(kuò)增得到了Intern αV亞基的部分外顯子5、外顯子6~29和部分外顯子30,長(zhǎng)度為2508 bp,編碼835個(gè)氨基酸;Integrin β3亞基的外顯子3、外顯子4~8和大部分外顯子9,以及外顯子15的中間部分,長(zhǎng)度分別為1035 bp和1059 bp,編碼344個(gè)氨基酸。序列比對(duì)發(fā)現(xiàn),兩個(gè)亞基的cDNA和氨基酸序列都與人和小鼠對(duì)應(yīng)序列有較高
2、的同源性。 通過(guò)RT-PCR和免疫組化方法對(duì)母豬妊娠第12、18和25天Integrin αV和β3亞基在子宮內(nèi)膜中的mRNA和蛋白表達(dá)研究發(fā)現(xiàn),胚胎附植的不同階段Intern αV和β3亞基在子宮內(nèi)膜中的表達(dá)都存在明顯差異,mRNA與蛋白表達(dá)的趨勢(shì)一致,都是在胚胎附植中期(妊娠第18天)的表達(dá)量最高。說(shuō)明其在母豬妊娠早期,即胚胎的黏附和附植過(guò)程中有重要作用。免疫組化結(jié)果顯示:Integrin αV在子宮內(nèi)膜腺體上皮、腔上皮、間
3、質(zhì)細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞等細(xì)胞上都有免疫陽(yáng)性反應(yīng),在胚胎著床的不同時(shí)期具有明顯變化,妊娠第18天表達(dá)較強(qiáng)。Integrin β3的免疫陽(yáng)性反應(yīng)與IntegrinαV基本一致,但是,不如Integrin αV的表達(dá)變化明顯。實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)Integrin αV和β3在位于子宮內(nèi)膜腔上皮下面的基質(zhì)中有較強(qiáng)的表達(dá),同樣在妊娠第18天表達(dá)最強(qiáng)。說(shuō)明豬的子宮內(nèi)膜基質(zhì)具有類蛻膜化的反應(yīng),只是與人和其他哺乳動(dòng)物相比,其蛻膜化的程度相對(duì)較弱而已。
4、 對(duì)受精配種后母豬血液FSH、LH、E<,2>和P<,4>水平檢測(cè)發(fā)現(xiàn),相對(duì)于未妊娠時(shí)期,在妊娠前25天內(nèi)FSH和LH的水平都有所下降,但妊娠第12~25天內(nèi)變化不顯著(p>0.05)。在妊娠第12~25天期間P<,4>的水平變化也不是很大,然而,E<,2>的水平以及E2:P4的比值卻明顯增加。子宮內(nèi)膜中Integrin αV和β3 mRNA的表達(dá)與血液中LH、FSH、E<,2>和P<,4>的水平都呈現(xiàn)負(fù)相關(guān),但相關(guān)性都不顯著性(p
5、>0.05)。表明,Intern αV和β3的表達(dá)不受生殖激素影響,或影響很小。 利用PCR-SSCP方法對(duì)Integrin β3、LIF和IL-1β基因多態(tài)性與大白豬產(chǎn)仔數(shù)之間的關(guān)系進(jìn)行了研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn)Integrin β3對(duì)產(chǎn)仔數(shù)影響不顯著(p>0.05)。對(duì)LIF基因研究表明,三胎以上LJF1位點(diǎn)優(yōu)勢(shì)等位基因?qū)NB和NBA的加性效應(yīng)分別為0.28和0.32;而LIF2位點(diǎn)優(yōu)勢(shì)基因的加性效應(yīng)分別為0.29和0.11。兩個(gè)位
6、點(diǎn)合并分析結(jié)果表明,在三胎以上或所有胎次,合并基因型AAAA、ABBB 和BBBB 的TNB 和NBA 都顯著高于 AAAB、AABB 和 ABAB 基因型。其中,AAAA基因型母豬的所有胎次的TNB和NBA都要比AAAB型母豬分別高1.76(p<0.001)和1.44頭(p<0.01)??傊?,LIF基因?qū)δ肛i的產(chǎn)仔數(shù)有顯著影響。對(duì)IL-1β基因研究發(fā)現(xiàn),分別在310 bp和347 bp處各發(fā)現(xiàn)一個(gè)突變位點(diǎn),其中310 bp處的突變對(duì)產(chǎn)
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