豬Lhx8的結(jié)構(gòu)及在組織和附植前胚胎中的表達(dá)分析.pdf

1、Lhx8是最新鑒定的LIM家族成員之一，最新研究表明，Lhx8在卵子發(fā)生的早期階段對(duì)于維持卵母細(xì)胞的分化和存活有著極為重要的作用。對(duì)Lhx8基因的克隆測序和初步分析，可以為研究豬的Lhx8基因的生物學(xué)功能和品種改良提供基礎(chǔ)的基因信息.
　　 本文采用電子克隆的方法，結(jié)合RT-PCR和RACE技術(shù)，獲得了豬Lhx8基因的cDNA全序列。利用生物信息學(xué)方法預(yù)測了該蛋白的結(jié)構(gòu)和功能，并進(jìn)行了同源序列多重比對(duì)和分子系統(tǒng)發(fā)生分析。利用實(shí)時(shí)

2、熒光定量(Real-time)PCR技術(shù)分析了豬Lhx8基因的mRNA在不同組織和胚胎發(fā)育不同時(shí)期的相對(duì)表達(dá)水平。
　　 1 Lhx8基因的克隆測序
　　 用人的Lhx8基因的cDNA全序列作為電子探針，分別從NCBI的dbEST和UniGene數(shù)據(jù)庫釣取了共3條豬的EST序列，將其輸入DNAstar-SeqMan程序，最后拼接出2個(gè)重疊群(Contig)序列。在此基礎(chǔ)上，利用Oligo6.0軟件手動(dòng)設(shè)計(jì)引物，借助RT-

3、PCR和RACE技術(shù)一方面驗(yàn)證了電子克隆的正確性；另一方面擴(kuò)增出cDNA全序列，長度為1681bp,GenBank登錄號(hào)為FJ587986.
　　 2 Lhx8蛋白的生物信息學(xué)分析
　　 借助生物信息學(xué)網(wǎng)絡(luò)資源和軟件，預(yù)測出豬Lhx8基因開放閱讀框的長度為885bp，編碼295個(gè)氨基酸殘基，且兩側(cè)分別是243bp的5’UTR和553bp的3,UTR.通過對(duì)蛋白序列相似性檢索，預(yù)測出豬Lhx8蛋白不含有信號(hào)肽，不含有跨膜區(qū)

4、，定位于細(xì)胞核中，而且確定其含有LIM結(jié)構(gòu)域。推測豬Lhx8蛋白具有DNA結(jié)合活性，參與染色質(zhì)修飾和基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控。
　　 3 Real-timePCR分析Lhx8基因在組織中的相對(duì)表達(dá)
　　 采用RT-PCR技術(shù)，分析了豬Lhx8基因在不同組織中的相對(duì)表達(dá)水平，結(jié)果表明：Lhx8基因在性腺、腦組織、免疫組織和骨骼肌中有表達(dá)，而在心臟、肝、脾、腎、脂肪和肺組織中沒有表達(dá)，推測Lhx8基因在豬性腺、免疫器官和腦的發(fā)育和功能維