中藥半枝蓮對5-氟尿嘧啶抗肝癌增強(qiáng)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)以4～6周齡雄性BALB/Cnu裸鼠為研究對象，制備肝癌裸鼠移植瘤模型，研究半枝蓮體內(nèi)抗腫瘤活性，觀察半枝蓮(BarbatedSkullcupHerb)促進(jìn)氟脲嘧啶(5-FU)對人肝癌裸鼠移植瘤的抑瘤作用，并探討兩者協(xié)同抗腫瘤的作用機(jī)制，為肝癌治療提供新思路。 方法：將人肝癌HepG2細(xì)胞培養(yǎng)至對數(shù)生長期，用含0.02％EDTA的0.0125％胰酶消化，PBS洗滌細(xì)胞兩次，1000rpm離心3min，生理鹽水調(diào)整細(xì)胞

2、懸液濃度為1×108/ml，每只裸鼠肩部皮下注射0.2ml.接種細(xì)胞第二天后，將60只裸鼠隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為陽性對照組(5-氟尿嘧啶25mg/kg)陰性對照組(生理鹽水組)，受試藥A組(半枝蓮50mg/kg+5-氟尿嘧啶25mg/kg)，受試藥B組(半枝蓮30mg/kg+5-氟尿嘧啶25mg/kg)，受試藥C組(組方：半枝蓮10mg/kg+5-氟尿嘧啶20mg/kg)，半枝蓮治療組(100mg/kg)。陽性對照組(5-FU

3、組)，腹腔注射5-FU25mg/kg.d，每周給藥兩次，半枝蓮A、B、C組每天分別用半枝蓮50mg/kg、30mg/kg、10mg/kg灌胃，并且每組腹腔注射5-FU25mg/kg.d，每周給藥兩次。半枝蓮治療組每天用半枝蓮100mg/kg灌胃，陰性對照組每天口服同體積生理鹽水。觀察裸鼠成瘤情況和精神、飲食、活動(dòng)、大小便等一般情況，每周用游標(biāo)卡尺測量瘤體最大長度(a)、寬度(b)和高度(c)，根據(jù)公式V=ab2/2，計(jì)算腫瘤體積，并畫出

4、腫瘤體積時(shí)間生長曲線。給藥5周后經(jīng)裸鼠眼眶靜脈叢取血后處死裸鼠(分離血清-20口凍存?zhèn)溆?，剝離瘤組織，肝臟，脾臟，并稱重，計(jì)算每組平均瘤重和腫瘤生長抑制率。放免法檢測各組裸鼠血清中外周血甲胎蛋白(AFP)含量，酶免法檢測各組裸鼠血清中β-內(nèi)啡肽和腫瘤組織中過氧化物酶體增殖物活化受體-γ的表達(dá)，并檢測腫瘤組織中細(xì)胞色素C和線粒體鈣含量。 結(jié)果：人肝癌裸鼠移植瘤模型制備成功，腫瘤生長曲線顯示陰性對照組腫瘤呈遞增性生長，而半枝蓮治療

5、組和陽性對照組(5-氟尿嘧啶組)生長曲線則較為低平，腫瘤生長明顯受到抑制，半枝蓮治療組抑瘤率為26.4％，陽性對照組為24.4％，均與陰性對照組差異有顯著性(p＜0.05)，受試藥A、B、C組的抑瘤率分別為30％、39.4％、33.1％，均與陽性對照組差異有顯著性(p＜0.05)，受試藥B組與受試藥A、C組差異有顯著性。 (p＜0.01)。半枝蓮治療組和受試藥A、B、C組組裸鼠脾臟和肝臟的重量均顯著增加(與陽性對照組比較，p＜0

6、.05或p＜0.01)，提示半枝蓮具有增強(qiáng)裸鼠免疫力，減少5-FU導(dǎo)致肝臟損傷的作用。陽性對照組或半枝蓮治療組腫瘤組織CytC有所升高而線粒體鈣的含量有所降低，受試藥B組降低顯著，同時(shí)受試藥B組腫瘤組織PPARγ和血清中β-內(nèi)啡肽的含量顯著增加。 結(jié)論：半枝蓮有體內(nèi)抗腫瘤活性，對人肝癌裸鼠移植瘤的生長有抑制作用。尤其受試藥B組(半枝蓮30mg/kg)顯著促進(jìn)陽性對照組(5-氟尿嘧啶25mg/kg)對裸鼠肝癌移植瘤的抑瘤作用，可并