miR-195對肝癌Bel-7402-5-FU細胞5-氟尿嘧啶敏感性的影響.pdf

1、目的:探討微小RNA miR-195對肝癌耐藥細胞株Bel-7402/5-FU5-氟尿嘧啶敏感性的影響以及作用機制。
　　方法:運用miRNAs芯片技術篩選Bel-7402及Bel-7402/5-FU細胞中差異表達miRNAs;運用靶基因預測軟件pictar并結合miRNAs芯片結果預測差異表達miRNAs可能調控的Bcl-2基因家族靶基因;miR-195真核表達質粒載體pSilencer3.1-H1 neo/miR-195的構建

2、;將miR-195真核表達質粒載體轉染至Bel-7402/5-FU細胞;流式細胞術檢測細胞凋亡情況;Western-blot檢測細胞Bcl-2、Bcl-XL、Bax、p53蛋白表達的情況。
　　結果:miRNAs芯片結果顯示Bel-7402/5-FU及Bel-7402兩種細胞同一miRNA表達量比值大于2的高表達miRNA有miR-192和miR-194,同一miRNA表達量比值小于0.5的低表達miRNA有miR-195、miR

3、-199a、miR-200a、miR-125a等;pictar軟件預測與Bcl-2基因家族特異性作用的miRNAs有:miR-107、miR-15a、miR-16、miR-103、miR-195、miR-122等共31種,結合miRNAs芯片結果,選擇miR-195作為我們研究的miRNA;流式細胞術:Bel-7402/5-FU細胞miR-195載體轉染組、陰性對照cel-miR-67轉染組、空載體轉染組及未轉染組,用406μg/ml5

4、-Fu處理24小時的上述4組細胞,流式細胞儀檢測,Bel-7402/5-FU細胞miR-195載體轉染組凋亡率較陰性對照轉染cel-miR-67組、轉染空載體組和未轉染組增加,其凋亡率分別為:12.1±0.64％、2.5±0.53%、2.2±0.48%、1±0.52%;加藥處理24小時的凋亡率分別為26.9±0.89%、9.8±0.77%、9.2±0.78%、7.6±0.86%;Western-blot檢測結果顯示:miR-195可降低