5-氟尿嘧啶腹腔內(nèi)緩釋化療的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：1.描繪5-氟尿嘧啶腹腔內(nèi)緩釋化療后家兔門(mén)靜脈血中5-FU的濃度曲線。 2.探討5-氟尿嘧啶腹腔內(nèi)緩釋化療對(duì)H22腹水瘤小鼠的抑瘤作用。 3.探討5-氟尿嘧啶腹腔內(nèi)化療和緩釋化療對(duì)H22細(xì)胞中TP、DPD、TPmRNA、DPDmRNA表達(dá)的不同影響。 方法：1.將5-氟尿嘧啶緩釋劑注入家兔腹腔內(nèi)，并在給藥后的不同時(shí)間抽取門(mén)靜脈血，用高效液譜色相法測(cè)定其中5-氟尿嘧啶的濃度，描繪其濃度曲線，并計(jì)算曲線下面積(

2、AUC)。 2.以H22腹水瘤小鼠為模型，用5-氟尿嘧啶緩釋劑行腹腔內(nèi)化療，觀察動(dòng)物的生存期、體重，并抽取腹水細(xì)胞行流式細(xì)胞學(xué)檢查測(cè)定細(xì)胞周期和凋亡比例，評(píng)價(jià)其抑瘤作用。 3.應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)EnVision法檢測(cè)H22細(xì)胞中TP、DPD蛋白的表達(dá)；運(yùn)用熒光定量PCR方法從分子水平上檢測(cè)H22細(xì)胞中TPmRNA、DPDmRNA的表達(dá)。 結(jié)果：1.緩釋組家兔門(mén)靜脈的5-FU血藥濃度的最高值出現(xiàn)在給藥后2小時(shí)左右，達(dá)

3、0.82ug/ml，持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，在給藥16天后仍可測(cè)出，且隨時(shí)間延長(zhǎng)門(mén)靜脈血藥濃度變化較小。腹腔組家兔在給藥后15分鐘門(mén)靜脈血藥濃度達(dá)20.67ug/ml，至24小時(shí)時(shí)濃度較低。計(jì)算各組曲線下面積，結(jié)果：AUC靜脈組=21.57(ug/ml·h)；AUC腹腔組=42.85(ug/ml·h)；AUC緩釋組=70.08(ug/ml·h)。 2.計(jì)算各組H22腹水瘤小鼠的生存期，發(fā)現(xiàn)緩釋組小鼠的平均生存期為15.3天，腹腔組小鼠的平

4、均生存期為13.7天，相對(duì)于對(duì)照組，緩釋組和腹腔組的生存期分別延長(zhǎng)了27.5％和14.2％。其生存期兩兩比較結(jié)果：對(duì)照組和腹腔組及緩釋組間皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，腹腔組和緩釋組之間也有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而對(duì)照組和緩釋對(duì)照組之間無(wú)明顯差異。 實(shí)驗(yàn)第9天時(shí)腹腔組小鼠腹水細(xì)胞的增殖指數(shù)為30％，緩釋組為37％，與對(duì)照組(47％)相比差異皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；而實(shí)驗(yàn)第12天時(shí)腹腔組小鼠腹水細(xì)胞的增殖指數(shù)為38％，與對(duì)照組(3

5、9％)無(wú)明顯差異，而緩釋組(32％)與對(duì)照組仍有明顯差異(P＜0.05)。同樣，各組小鼠的腹水細(xì)胞的凋亡率也有相似的結(jié)果。 3.免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)顯示實(shí)驗(yàn)第9天時(shí)腹腔組小鼠腹水細(xì)胞TP蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率為45.00％，與對(duì)照組(68.33％)相比較，存在顯著差異(P＜0.05)。緩釋組腹水細(xì)胞中的TP蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為65.00％，與對(duì)照組無(wú)明顯差異(P＞0.05)。腹腔組和緩釋組之間也存在顯著差異(P＜0.05)。 實(shí)驗(yàn)

6、第9天時(shí)腹腔組小鼠腹水細(xì)胞中DPD蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率為83.33％，與對(duì)照組(61.67％)相比較，存在顯著差異(P＜0.05)。緩釋組腹水細(xì)胞中的DPD蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為71.67％，較對(duì)照組和緩釋對(duì)照組高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。腹腔組和緩釋組之間差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 4.熒光定量PCR方法檢測(cè)顯示實(shí)驗(yàn)第9天時(shí)各組小鼠腹水細(xì)胞中TPmRNA的相對(duì)表達(dá)量無(wú)明顯差異(P＞0.05)。DPDmRNA的相對(duì)表

7、達(dá)量：對(duì)照組為0.060±0.006，腹腔組為0.088±0.014，緩釋組為0.075±0.008，緩釋對(duì)照組為0.063±0.007。腹腔組、緩釋組DPDmRNA的表達(dá)量與對(duì)照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；腹腔組與緩釋組相比，差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 結(jié)論：①5-氟尿嘧啶腹腔內(nèi)緩釋化療延長(zhǎng)了門(mén)靜脈血中5-FU有效濃度的持續(xù)時(shí)間，增大了濃度曲線中的曲線下面積。②5-氟尿嘧啶腹腔內(nèi)緩釋化療延長(zhǎng)了H22腹

8、水瘤小鼠的生存時(shí)間，抑制了腫瘤細(xì)胞的增殖，增加了腫瘤細(xì)胞的凋亡，并且作用較持久。③5-氟尿嘧啶腹腔內(nèi)化療降低了H22肝癌細(xì)胞中TP蛋白的表達(dá)量，增加了DPD蛋白的表達(dá)量；而5-氟尿嘧啶腹腔內(nèi)緩釋化療對(duì)H22細(xì)胞的TP、DPD表達(dá)量無(wú)明顯影響。④5-氟尿嘧啶腹腔內(nèi)化療和緩釋化療對(duì)H22細(xì)胞的TPmRNA表達(dá)量無(wú)明顯影響，但增加了DPDmRNA的表達(dá)量；并且5-氟尿嘧啶腹腔內(nèi)化療對(duì)DPDmRNA的上調(diào)作用更明顯。腹腔化療增加了5-FU的分解