高壓氧對腦缺血再灌注小鼠血腦屏障通透性的影響.pdf

1、中國醫(yī)科大學博士學位論文高壓氧對腦缺血再灌注小鼠血腦屏障通透性的影響姓名：趙紅申請學位級別：博士專業(yè)：病理學與病理生理學指導教師：張海鵬2003.3.13腦皮質血流檢測：用激光多普勒血流儀監(jiān)測腦皮質血流，打開顱腔，選擇測定腦血流，于缺血前、缺血10分鐘、20分鐘、30分鐘，再灌注4小時、1l小時、23小時、48小時、72小時分別測定腦皮質血流值。4組織依文思蘭(Evansblue，EB)定量測定：參考UdakaK法。在處死動物前1小時經

2、尾靜脈注射2％Evans蘭，在檢測前20分鐘進行在體心臟灌注，直至心房流出清亮的液體為準。術后4小時、11小時、23小時、48小時、72小時處死小鼠，摘取腦組織用電子天平精確秤其濕重后，投人中號試管中，分別加入3ml甲酰胺，加蓋后于45℃的水浴箱孵育48h，輕輕搖勻，離心15min(3000r／min)，取上清液在722型光柵分光光度計比色(入=632nm)。5ABC—ELISA法檢測細胞因子的含量：術后72小時處死小鼠于冰盤上快速剝離

3、腦部組織，以冰冷的PBS沖洗，濾紙吸干，立即于電子天平秤重，配成10％腦組織勻漿，勻漿液于4℃4000r／min離心15分鐘，取上清液，采用雙抗體夾心ABC—ELISA法在波長492nm處檢測IL一1B、TNFa、IL一6、IL一8、IL—lO的含量。6明膠酶譜法活力測定：取海馬區(qū)的腦組織經勻漿離心制成蛋白質抽提液，取20ul上樣于含5mg／ml明膠的聚丙烯酰胺凝膠中，20rnA恒流電泳，電泳后，將凝膠于25％的TritonX—100液

4、內振蕩37℃，1小時，酶緩沖液(50mmol／1Tris，PH75；200mmol／INaCl；500mmol／1CaCl2)內孵育37℃，42小時。孵育結束后經染色液(005％考馬斯亮藍、30％甲醇、10％乙酸)染色3小時，及脫色液A、B、c(甲醇濃度為30％、20％、10％；乙酸濃度分別為10％、10％、5％)分別脫色O5、1、2小時顯示出MMP一2和MMP9位于藍色背景上的透亮帶。7抗氧化酶類(GSH—PX、SOD、CAT)及NO