環(huán)孢菌素A對(duì)腦缺血再灌注后血腦屏障的影響.pdf

1、目的:通過(guò)建立小鼠腦缺血再灌注模型，腹腔注入不同劑量的環(huán)孢菌素A后，觀察小鼠腦缺血再灌注后神經(jīng)功能評(píng)分、梗死灶、腦組織水含量及伊文思藍(lán)滲出量的變化情況，并用Western Blot法分析CypA、Akt、NF-κB、MMP9、Claudin-5等變化趨勢(shì)，以探討環(huán)孢菌素A(Cyclosporin A，CsA)對(duì)小鼠腦缺血再灌注(Ischemia-reperfusion，I/R)后血腦屏障的影響及其機(jī)制，為更好的治療腦缺血提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。<

2、br>　　方法:1.采用尼龍線栓法復(fù)制小鼠右側(cè)腦局灶缺血再灌注(I/R) MCAO模型;2.將C57、apoe-/-小鼠分別等量隨機(jī)分為:假手術(shù)組、腦缺血再灌注(I/R)組、溶劑(Vehicle)組、小劑量(10mg/kg) CsA組、大劑量(20mg/kg) CsA組。分別于術(shù)后1d、3d、5d、7d不同時(shí)間點(diǎn)以不同的方式處死;3.術(shù)后評(píng)價(jià)小鼠腦缺血再灌注模型是否成功，并于各個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分及轉(zhuǎn)角試驗(yàn);4.2％2，3，5，-氯

3、化三苯基四氮唑(TTC)染色檢測(cè)小鼠腦梗死灶面積;5.干濕重法測(cè)定各組小鼠不同時(shí)間點(diǎn)腦組織水含量;6.靜脈注入伊文思藍(lán)(Evans blue，EB)后，通過(guò)檢測(cè)其光密度值（OD值）及滲出情況分析血腦屏障通透性。7.Western Blot法分析CypA、Akt、NF-κ B、MMP9、Claudin-5等變化趨勢(shì)。
　　結(jié)果:1.神經(jīng)功能評(píng)價(jià):假手術(shù)組小鼠在術(shù)后未出現(xiàn)神經(jīng)功能障礙，其余各組在不同時(shí)間點(diǎn)均出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)功能障礙，

4、與假手術(shù)組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01);大劑量CsA組與小劑量CsA組比較各時(shí)間點(diǎn)均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。2.梗死灶面積:與 I/R組比較，小劑量CsA組與大劑量CsA組腦組織梗死灶面積明顯減少(P＜0.01)，Vehicle組則無(wú)明顯變化(P＞0.05);大劑量CsA組梗死灶面積與小劑量CsA組相比均有減少(P＜0.05); apoe-/-各組與C57各組梗死灶面積相比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。3.腦組織水含

5、量:C57、apoe-/-小鼠各組腦水含量與其假手術(shù)組相比均明顯升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01);與I/R組相比，Vehicle組無(wú)明顯差異(P＞0.05)，而大劑量CsA組及小劑量CsA組較其明顯減少(P＜0.05)，且大劑量CsA組較小劑量CsA組腦組織水含量少(P＜0.05);apoe-/-小鼠腦組織水含量均高于與其對(duì)應(yīng)的與C57小鼠組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。4.伊文思藍(lán):C57、apoe-/-小鼠各組伊文思藍(lán)OD值及

6、滲出程度與其假手術(shù)組相比均明顯升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01);與I/R組伊文思藍(lán)OD值及滲出程度相比，Vehicle組無(wú)明顯差異，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，而大劑量CsA組及小劑量CsA組較其均明顯減少(P＜0.01)，且大劑量CsA組較小劑量CsA組小(P＜0.05); apoe-/-小鼠組伊文思藍(lán)OD值及滲出程度均高于與其對(duì)應(yīng)的與C57小鼠組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。5.相關(guān)蛋白表達(dá):與假手術(shù)組相比較，其余各組P

7、-Akt、Cyclophilin A(CypA)、NK-kB、MMP-9表達(dá)均不同程度上調(diào)(P＜0.05)，Claudin-5表達(dá)水平下調(diào)(P＜0.05);與I/R組相比，CsA干預(yù)組P-Akt、Cyclophilin A(CypA)、NK-kB、MMP-9表達(dá)水平相對(duì)減少(P＜0.05)，且大劑量CsA組較小劑量CsA組表達(dá)減弱(P＜0.05)，而Claudin-5表達(dá)水平上調(diào)(P＜0.05)，且大劑量CsA組較小劑量CsA組表達(dá)上調(diào)

8、(P＜0.05); Vehicle組與I/R組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:1.大腦中動(dòng)脈區(qū)是人腦梗塞的好發(fā)部位。本文選擇的線栓法制作小鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈阻塞(MCAO)模型，其梗塞范圍較穩(wěn)定，不開(kāi)顱、可準(zhǔn)確控制缺血再灌注時(shí)間，并且其病理生理變化過(guò)程與人體相似，故該模型是研究腦缺血再灌注較為理想的動(dòng)物模型。2.小鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈阻塞(MCAO)模型經(jīng)CsA治療后，出現(xiàn)神經(jīng)功能缺損癥狀好轉(zhuǎn)，梗死灶面積減小，腦水腫減輕，