戊地昔布對人食管癌TE-1細胞遷移的影響及機制的研究.pdf

1、目的:食管癌是我國常見的消化道惡性腫瘤之一，由于發(fā)現(xiàn)較晚，缺乏有效的治療措施，其5年生存率僅為10％左右，死亡率居我國惡性腫瘤的第4位，其死亡率高的原因之一是由于腫瘤的轉(zhuǎn)移，很多患者在確診時已處于中晚期，由于中晚期的腫瘤經(jīng)常出現(xiàn)局部侵襲和遠處轉(zhuǎn)移，大多數(shù)患者死于腫瘤的轉(zhuǎn)移，而不是原發(fā)腫瘤。因此，盡早檢測和抑制腫瘤轉(zhuǎn)移是當(dāng)前腫瘤研究中迫切需要解決的重要任務(wù)。近年來，國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，環(huán)氧化酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2

2、）在多種腫瘤中呈現(xiàn)過度表達，不僅與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，也參與了腫瘤的轉(zhuǎn)移和侵襲。
　　EMT（上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化）是指具有極性的上皮細胞轉(zhuǎn)換成具有移形能力的間質(zhì)細胞的一個過程，在此過程中，上皮細胞失去了極性，并失去細胞間的緊密連接和粘附能力。腫瘤細胞發(fā)生EMT可增強細胞的侵襲和遷移能力，從而使腫瘤形成局部浸潤和遠處轉(zhuǎn)移，這是腫瘤轉(zhuǎn)移的重要機制之一。EGF（表皮生長因子）、TGF（轉(zhuǎn)化生長因子）-β等都可誘導(dǎo)腫瘤細胞EMT的出現(xiàn)。

3、r>　　戊地昔布是第二代環(huán)氧化酶-2抑制劑，本實驗研究戊地昔布對人食管癌TE-1細胞遷移的作用及作用機制。
　　方法:
　　1.實驗分組:空白對照組、EGF表皮生長因子(50 ng·ml-1)組、戊地昔布(50μmol·L-1)處理組、EGF+戊地昔布處理組。
　　2.通過細胞劃痕實驗，檢測TE-1細胞的遷移能力。EGF刺激時間為24h，每組設(shè)6個復(fù)孔，分別取0h、24h拍照記錄，將每組各自的0h與24h記錄照片對比，

4、計算細胞遷移率。
　　3.Transwell體外遷移實驗檢測TE-1細胞遷移能力，EGF刺激時間為24h，實驗結(jié)束后，對細胞進行固定，染色處理，在倒置顯微鏡下進行照相，醋酸洗脫，并測量其570nm吸光度。
　　4.采用western blot方法，檢測TE-1細胞Vimentin和N-cadherin，E-cadherin，MMP-2和MMP-9蛋白的表達水平。
　　結(jié)果:
　　1.在50ng·ml-1的EGF（

5、表皮生長因子）刺激后，TE-1細胞形態(tài)發(fā)生了明顯的變化，呈現(xiàn)EMT樣的形態(tài)變化，失去原來的鵝卵石樣結(jié)構(gòu)，細胞變得狹長，邊緣伸出突起，細胞之間由原來的緊密連接變得松散，細胞間縫隙變大。
　　2.在細胞劃痕試驗中，對照組細胞在24h內(nèi)遷移了84％。EGF刺激后細胞遷移速度明顯加快，幾乎覆蓋了整個劃痕面積。戊地昔布可抑制未加增加EGF刺激的TE-1細胞的遷移速度，也抑制了EGF刺激組的TE-1細胞的遷移速度。
　　3.在Trans

6、well小室試驗中，結(jié)果和細胞劃痕實驗結(jié)果類似，EGF可明顯促進細胞遷移，給予戊地昔布后，可明顯降低未加EGF刺激的TE-1細胞的遷移速度和EGF誘導(dǎo)組的TE-1細胞的遷移速度。
　　4.EGF刺激可明顯增加TE-1細胞Vimenti和N-cadherin蛋白表達，降低E-cadherin蛋白表達。戊地昔布作用可降低EGF刺激的Vimentin和N-cadherin的升高。
　　5.戊地昔布可降低未加EGF刺激組和EGF刺激