骨折三期治則對(duì)家兔骨折愈合過(guò)程中FGF-2mRNA，TGF-β-,1-mRNA表達(dá)調(diào)控的研究.pdf

1、1研究背景
　　 隨著交通運(yùn)輸業(yè)的發(fā)展,骨折成為臨床上的常見(jiàn)病和多發(fā)病之一。
　　 目前,中醫(yī)骨折三期治則已成為現(xiàn)代中醫(yī)藥治療骨折的指導(dǎo)原則[1.2],然而對(duì)于骨折三期治則的分子生物學(xué)機(jī)制研究則很少。
　　 為進(jìn)一步揭示中醫(yī)骨折三期治則的分子生物學(xué)機(jī)制,應(yīng)用原位雜交技術(shù)檢測(cè)骨折愈合過(guò)程中FG-2mRNA,TG-β1mRNA基因轉(zhuǎn)錄水平。研究其分布及表達(dá)規(guī)律及時(shí)間相,從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的角度揭示中醫(yī)骨折三期治則的科學(xué)性,指

2、導(dǎo)骨折的臨床治療,推動(dòng)中醫(yī)骨科治療的快速發(fā)展。
　　 2材料與方法
　　 2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與骨折模型
　　 選用新西蘭家兔,健康,雄性,體重2±0.5 kg;在橈骨中下段1/3處,造成3mm完全橫斷骨折。
　　 2.2隨機(jī)分組
　　 將140只家兔隨機(jī)分為四組,每組35只,分別為三期組(中藥三期治療組)、一期組(中藥一期治療組)、模型組(模型對(duì)照組)和陽(yáng)性藥組(陽(yáng)性藥物對(duì)照組)。三期組、一期組與陽(yáng)性

3、藥組三組文中統(tǒng)稱中藥組。每個(gè)小組再隨機(jī)分為7個(gè)小組,每組5只。
　　 2.3干預(yù)方法
　　 將中藥制成含生藥5g·ml-1的濃縮口服液,滅菌后裝瓶冷藏備用。分早晚2次,灌胃。根據(jù)量效反應(yīng)確定實(shí)驗(yàn)最佳用藥劑量為2倍等效劑量。根據(jù)骨折愈合分期方法與家兔骨折局部組織學(xué)變化,將家兔骨折愈合過(guò)程分為三期:早期即術(shù)后1-7天；中期即術(shù)后8-28天；后期即術(shù)后29-56天。
　　 三期組根據(jù)“中醫(yī)骨折三期治療”原則,分三期治療

4、:早期活血化瘀、行氣止痛,選用加減肢傷一方；中期接骨續(xù)筋、舒筋活絡(luò),選用加減肢傷二方；后期補(bǔ)益肝腎、強(qiáng)筋壯骨,選用加減肢傷三方。一期組將骨折的早期、中期與后期合并為一期,活血化瘀、行氣止痛、接骨續(xù)筋、補(bǔ)益肝腎、強(qiáng)筋壯骨,選用肢傷一方、二方與三方加減方。陽(yáng)性藥組全程給骨折挫傷膠囊水溶液。模型組給予和實(shí)驗(yàn)組等量的蒸餾水灌胃,每日2次。
　　 2.4標(biāo)本處理
　　 術(shù)后第3、6、9、14、28、42、56天每組隨機(jī)抽取一小組家

5、兔用空氣栓塞法處死,取左側(cè)橈骨標(biāo)本為觀察對(duì)象,將標(biāo)本固定、脫鈣。
　　 2.5原位雜交
　　 檢測(cè)骨折標(biāo)本FGF-2mRNA,TGF-β1mRNA。
　　 2.6圖像及數(shù)據(jù)分析
　　 對(duì)骨折端骨干細(xì)胞、骨小梁、內(nèi)骨膜、外骨膜、纖維骨痂組織各取兩個(gè)高倍鏡視野,對(duì)陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞進(jìn)行MOD值測(cè)定。用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 3結(jié)論
　　 (1)中藥能促進(jìn)骨折愈合過(guò)程中不同組

6、織FGF-2mRNA,TGF-β1mRNA表達(dá),說(shuō)明中藥干預(yù)有促進(jìn)骨折愈合的作用。
　　 (2)骨折三期治療在不同組織表達(dá)都有促進(jìn)FGF-2mRNA,TGF-β1mRSA表達(dá)作用。這是骨折三期治療促進(jìn)骨折愈合的作用機(jī)制之一。
　　 (3)中藥對(duì)骨折愈合不同階段各種組織的FGF-2mRNA,TGF-β1mRNA表達(dá)有不同的作用,根據(jù)骨折愈合不同階段施以相應(yīng)治則的分期治療較不分期治療對(duì)于FGF-2mRNA,TGF-β1mRN

7、A表達(dá)的促進(jìn)作用更明顯,顯示中醫(yī)骨折分期治療是必要的。
　　 (4)中醫(yī)骨折三期治則分別針對(duì)骨折愈合不同時(shí)期的病理變化,采用相應(yīng)的中藥可以促進(jìn)相應(yīng)部位的FGF-2mRNA,TGF-β1mRNA表達(dá),是比較科學(xué)的骨折分期治療方法。
　　 5創(chuàng)新點(diǎn)
　　 (1)發(fā)現(xiàn)骨折愈合過(guò)程中不同組織中FGF-2mRNA,TGF-β1mRNA表達(dá)特征
　　 目前對(duì)于骨折愈合過(guò)程中FGF-2mRNA,TGF-β1mRNA表達(dá)

8、的研究,均是研究骨痂中FGF-2mRNA,TGF-β1mRNA的定量變化。揭示不同組織FGF-2mRNA,TGF-β1mRNA表達(dá)特征的研究,末見(jiàn)報(bào)道。
　　 (2)闡明骨折三期治療對(duì)骨折愈合過(guò)程中FGF-2mRNA,TGF-β1mRNA表達(dá)的作用
　　 目前僅對(duì)VEGFmRNA和BMP-2mRNA在骨折愈合過(guò)程中有過(guò)研究,通過(guò)研究骨折愈合過(guò)程中FGF-2mRNA,TGF-β1mRNA表達(dá)變化情況,揭示骨折三期治則促進(jìn)骨