骨折三期治則對家兔骨折愈合過程中FGF-2mRNA，TGF-β-,1-mRNA表達調(diào)控的研究.pdf

1、1研究背景
　　 隨著交通運輸業(yè)的發(fā)展,骨折成為臨床上的常見病和多發(fā)病之一。
　　 目前,中醫(yī)骨折三期治則已成為現(xiàn)代中醫(yī)藥治療骨折的指導原則[1.2],然而對于骨折三期治則的分子生物學機制研究則很少。
　　 為進一步揭示中醫(yī)骨折三期治則的分子生物學機制,應(yīng)用原位雜交技術(shù)檢測骨折愈合過程中FG-2mRNA,TG-β1mRNA基因轉(zhuǎn)錄水平。研究其分布及表達規(guī)律及時間相,從現(xiàn)代醫(yī)學的角度揭示中醫(yī)骨折三期治則的科學性,指

2、導骨折的臨床治療,推動中醫(yī)骨科治療的快速發(fā)展。
　　 2材料與方法
　　 2.1實驗動物與骨折模型
　　 選用新西蘭家兔,健康,雄性,體重2±0.5 kg;在橈骨中下段1/3處,造成3mm完全橫斷骨折。
　　 2.2隨機分組
　　 將140只家兔隨機分為四組,每組35只,分別為三期組(中藥三期治療組)、一期組(中藥一期治療組)、模型組(模型對照組)和陽性藥組(陽性藥物對照組)。三期組、一期組與陽性

3、藥組三組文中統(tǒng)稱中藥組。每個小組再隨機分為7個小組,每組5只。
　　 2.3干預(yù)方法
　　 將中藥制成含生藥5g·ml-1的濃縮口服液,滅菌后裝瓶冷藏備用。分早晚2次,灌胃。根據(jù)量效反應(yīng)確定實驗最佳用藥劑量為2倍等效劑量。根據(jù)骨折愈合分期方法與家兔骨折局部組織學變化,將家兔骨折愈合過程分為三期:早期即術(shù)后1-7天；中期即術(shù)后8-28天；后期即術(shù)后29-56天。
　　 三期組根據(jù)“中醫(yī)骨折三期治療”原則,分三期治療

4、:早期活血化瘀、行氣止痛,選用加減肢傷一方；中期接骨續(xù)筋、舒筋活絡(luò),選用加減肢傷二方；后期補益肝腎、強筋壯骨,選用加減肢傷三方。一期組將骨折的早期、中期與后期合并為一期,活血化瘀、行氣止痛、接骨續(xù)筋、補益肝腎、強筋壯骨,選用肢傷一方、二方與三方加減方。陽性藥組全程給骨折挫傷膠囊水溶液。模型組給予和實驗組等量的蒸餾水灌胃,每日2次。
　　 2.4標本處理
　　 術(shù)后第3、6、9、14、28、42、56天每組隨機抽取一小組家

5、兔用空氣栓塞法處死,取左側(cè)橈骨標本為觀察對象,將標本固定、脫鈣。
　　 2.5原位雜交
　　 檢測骨折標本FGF-2mRNA,TGF-β1mRNA。
　　 2.6圖像及數(shù)據(jù)分析
　　 對骨折端骨干細胞、骨小梁、內(nèi)骨膜、外骨膜、纖維骨痂組織各取兩個高倍鏡視野,對陽性表達細胞進行MOD值測定。用SPSS13.0統(tǒng)計分析軟件進行統(tǒng)計分析。
　　 3結(jié)論
　　 (1)中藥能促進骨折愈合過程中不同組

6、織FGF-2mRNA,TGF-β1mRNA表達,說明中藥干預(yù)有促進骨折愈合的作用。
　　 (2)骨折三期治療在不同組織表達都有促進FGF-2mRNA,TGF-β1mRSA表達作用。這是骨折三期治療促進骨折愈合的作用機制之一。
　　 (3)中藥對骨折愈合不同階段各種組織的FGF-2mRNA,TGF-β1mRNA表達有不同的作用,根據(jù)骨折愈合不同階段施以相應(yīng)治則的分期治療較不分期治療對于FGF-2mRNA,TGF-β1mRN

7、A表達的促進作用更明顯,顯示中醫(yī)骨折分期治療是必要的。
　　 (4)中醫(yī)骨折三期治則分別針對骨折愈合不同時期的病理變化,采用相應(yīng)的中藥可以促進相應(yīng)部位的FGF-2mRNA,TGF-β1mRNA表達,是比較科學的骨折分期治療方法。
　　 5創(chuàng)新點
　　 (1)發(fā)現(xiàn)骨折愈合過程中不同組織中FGF-2mRNA,TGF-β1mRNA表達特征
　　 目前對于骨折愈合過程中FGF-2mRNA,TGF-β1mRNA表達

8、的研究,均是研究骨痂中FGF-2mRNA,TGF-β1mRNA的定量變化。揭示不同組織FGF-2mRNA,TGF-β1mRNA表達特征的研究,末見報道。
　　 (2)闡明骨折三期治療對骨折愈合過程中FGF-2mRNA,TGF-β1mRNA表達的作用
　　 目前僅對VEGFmRNA和BMP-2mRNA在骨折愈合過程中有過研究,通過研究骨折愈合過程中FGF-2mRNA,TGF-β1mRNA表達變化情況,揭示骨折三期治則促進骨