廣藿香內(nèi)生真菌的活性篩選及露濕漆斑菌的次級代謝產(chǎn)物研究.pdf

1、植物內(nèi)生真菌（endophytic fungi）是指全部或部分生活史寄居在健康植物的細(xì)胞內(nèi)或者各類組織中的真菌，它們的存在不會給植物帶來明顯的病害癥狀。一般內(nèi)生真菌與宿主本身是互利互惠關(guān)系，而且內(nèi)生菌能夠產(chǎn)生與宿主植物相同或相近的具有生物活性的次級代謝產(chǎn)物。據(jù)報道，植物內(nèi)生真菌次級代謝產(chǎn)物具有抗腫瘤、抗菌、抗氧化、抗病毒等多種生物活性，因此植物內(nèi)生真菌次級代謝產(chǎn)物成為新型藥物開發(fā)的物質(zhì)來源。本論文從廣東藥學(xué)院大學(xué)城校區(qū)采集的廣藿香植株中

2、分離得到38株內(nèi)生真菌，通過對各菌株發(fā)酵液粗提物化合物豐富程度、抗菌活性實驗、細(xì)胞毒活性實驗等指標(biāo)進(jìn)行篩選，菌株露濕漆斑菌（Myrothecium roridum，A553）發(fā)酵液粗提物能明顯抑制肝癌細(xì)胞HepG2、人神經(jīng)癌細(xì)胞SF-268、非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H460等細(xì)胞株活性，樣品濃度在100μg/mL時生長抑制率分別為94.3％，88.7%和83.8%。通過對露濕漆斑菌（Myrothecium roridum）菌株進(jìn)行大批量

3、發(fā)酵培養(yǎng)、代謝產(chǎn)物分離提取等，以期篩選出具有明顯細(xì)胞毒活性化合物。
　　目的：篩選出廣藿香內(nèi)生真菌中高活性菌株，研究廣藿香內(nèi)生真菌露濕漆斑菌（myrothecium roridum）次級代謝產(chǎn)物活性物質(zhì)。
　　方法：主要考察內(nèi)生真菌發(fā)酵液粗提物細(xì)胞毒活性、抗菌活性等指標(biāo)進(jìn)行篩選優(yōu)質(zhì)菌株；對優(yōu)質(zhì)菌株發(fā)酵液和菌絲體提取液采用常規(guī)正向硅膠柱層析、凝膠Sephadex LH-20柱層析、C18反相層析柱、高效液相色譜柱、薄層層析制備

4、板和重結(jié)晶等方法分離純化化合物，并通過理化常數(shù)測定及波譜數(shù)據(jù)分析等手段（1H-NMR、13C-NMR、EI-MS、HR-ESI-MS、1H-1H COSY、HSQC、HMBC等）對分離純化的化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定；以神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞SF-268、乳腺癌細(xì)胞MCF-7、非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株NCI-H460、肝癌細(xì)胞HePG-2為供試細(xì)胞株，采用SRB染色法對化合物進(jìn)行體外細(xì)胞毒活性研究；以白色念珠菌作為供試菌株，采用濾紙片法對所得化合物進(jìn)行體外抗

5、菌活性研究。
　　結(jié)果：從分離得到的38株內(nèi)生真菌中篩選出13株高活性菌株；從發(fā)酵液和菌絲體中共分離到20個化合物，經(jīng)波譜數(shù)據(jù)分析和樣品對照鑒定出其中14個化合物，分別為：羥基酪醇(Hydroxytyrosol, MR1)，2-羥基-6-（2-羥基丙基）苯甲酸(2-hydroxy-6-(2-hydroxypropyl)benzoic acid,MR2)，1,3-二-O-[2',2'-二-（對-亞苯基）異亞丙基]甘油(MR3)，桿孢

6、菌素E異構(gòu)體(MR4)，真菌毒素mytoxin B(MR5),對羥基安息香醛(4-hydroxybenzaldehyde,MR6)，nepethalate A(MR7)，16-羰基桿孢菌素E(MR8)，啤酒甾醇(MR9)，尿嘧啶核苷(uridine, MR10)，吡咯烷酮(MR12)，大黃酚(MR13)，5-羥甲基糠醛(MR14)，麥角甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(MR15)。
　　結(jié)論：34.2%的菌株發(fā)酵液粗提物具有顯著

7、生物活性?；衔颩R1、MR2、MR3、MR6、MR7、MR8、MR12-MR15為首次從該菌株次級代謝產(chǎn)物中分離得到，化合物 MR8為新化合物；化合物MR3、MR4、MR5、MR8、MR10對神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞SF-268、乳腺癌細(xì)胞MCF-7、非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株NCI-H460和肝癌細(xì)胞HePG-2均表現(xiàn)出較好的活性。MR9對乳腺癌細(xì)胞MCF-7、非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株NCI-H460和肝癌細(xì)胞HePG-2具有較好的抑制作用。化合物MR4對