Sorafenib通過阻斷Hedgehog-AKT信號通路誘導(dǎo)白血病干細(xì)胞凋亡.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)2011級碩士學(xué)位論文Sorafenib通過阻斷Hedgehog／AKT信號通路誘導(dǎo)白血病干細(xì)胞凋亡SorafenibinduoesLeukemicStemCeIIsApoptosisthroughbIookingHedgehog／AKTSignaIingPathway課題來源：國家自然科學(xué)基金(81370664)廣東省科技計劃項目(20118061300033)廣東省中醫(yī)藥局課題(20131103)學(xué)位申請人導(dǎo)師姓名專業(yè)名

2、稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學(xué)院答辯委員會主席答辯委員會成員論文評閱人夏平方余妙蓉教授內(nèi)科學(xué)(血液病)專業(yè)型碩士研究生笫二臨床醫(yī)學(xué)院郭坤元教授林偉掀李揚(yáng)秋掀李群華教授張青教授馬麗萍教授；曾英堅教授2014年05月21日廣州碩士學(xué)位論文美國FDA批準(zhǔn)，成為治療晚期腎癌和肝細(xì)胞癌的一線藥物。近年來，學(xué)者們的研究發(fā)現(xiàn)，Sorafenib的作用并不僅限于抑制Raf激酶，它同時也是其他多種激酶的抑制劑，譬如，F(xiàn)LT3、cKit、生長因子受體等；因此，S

3、orafenib作為新型的抗腫瘤靶向藥物廣泛被推廣，已用于肝癌、肺癌、急性髓系白血病等人類惡性腫瘤I／II／III期臨床試驗。在臨床前實驗研究中，Sorafenib也突顯了它在急性髓系白血病中殺傷腫瘤的作用。有研究發(fā)現(xiàn)，Sorafenib在不影響正常CD34造血干細(xì)胞的前提下，能通過改變Bcl2蛋白家族中Mcl1和Bax蛋白的表達(dá)，誘導(dǎo)多種急性髓系白血病細(xì)胞株和原代白血病細(xì)胞發(fā)生線粒體途徑凋亡。然而，眾所周知，生存信號Hedgehog／

4、AKT通路的異常激活對LSCs維持干細(xì)胞特性及多重耐藥性至關(guān)重要，Sorafenib是否能通過阻斷Hedgehog／AKT信號通路誘導(dǎo)LSCs線粒體途徑凋亡，‘目前尚未明確。由此，我們設(shè)想Sorafenib通過下調(diào)Hedgehog／AKT信號通路殺傷LSCs，可有效清除患者體內(nèi)殘留的白血病細(xì)胞。本課題在前期研究基礎(chǔ)之上，以CD34CD38一LSCs為研究對象，Sorafenib為干預(yù)手段，探討多激酶抑制劑Sorafenib對LSCs的作

5、用及相關(guān)機(jī)制，為Sorafenib有效清除LSCs，治療白血病提供實驗基礎(chǔ)和理論依據(jù)。方法第一章從KGla細(xì)胞株分選CD34CD38一白血病干細(xì)胞采用免疫磁珠分選技術(shù)(負(fù)選法)，從人急性髓系白血病KGla細(xì)胞株中分離出CD34CD38細(xì)胞；流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面膜CD34和CD38抗原表達(dá)，分析分選的LSCs純度。第二章Sorafenib誘導(dǎo)白血病干細(xì)胞線粒體途徑凋亡1以MTT實驗檢測不同濃度(0801xM)的Sorafenib對LSC

6、s的細(xì)胞毒作用；以PI為標(biāo)記，流式細(xì)胞術(shù)檢測不同時間點(024h)40pMSorafenib干預(yù)LSCs的凋亡率：以細(xì)胞核染色(Hoechst33342染色)為實驗方法，用激光掃描共聚焦顯微鏡從形態(tài)學(xué)上觀察不同濃度(0409M)的Sorafenib誘導(dǎo)LSCs凋亡；Westernblotting技術(shù)檢測Sorafenib干預(yù)LSCs后線粒體凋亡途徑關(guān)鍵蛋白Caspase9、Caspase3、PARP蛋白的表達(dá)變化；2運(yùn)用SPSSl70軟