豬血Cu-Zn-SOD的分離純化及其理化性質(zhì)的研究.pdf

1、以新鮮豬血為材料，在低溫條件下，離心除去血漿后，用生理鹽水洗滌紅細胞。向干凈的紅細胞中加入等體積的超純水?dāng)嚢璧萌苎骸⑷苎阂来芜M行乙醇.氯仿處理除去血紅蛋白、熱變性、超濾濃縮和丙酮沉淀，得到了SOD粗酶液，再經(jīng)過DE-FF柱層析、超濾濃縮及冷凍干燥得純化SOD。本實驗對熱變性的溫度(40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃、75℃)與時間(10min、15min、20min、25min、30min)、丙酮沉淀時丙酮與粗

2、酶液體積比(0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0)及DE-FF柱層析的洗脫速度(1.0ml/min、1.5 ml/min、2.0 ml/min)與進樣量(0.5ml、1.5ml、2.5ml)的最佳工藝參數(shù)進行確定，最后確定熱變性的最適溫度與時間分別為55℃和20min，丙酮與粗酶液的最適體積比為1.2，DE-FF柱層析的最適洗脫速度與進樣量分別為1.5ml/min和1.5ml。經(jīng)過上述純化路線最終獲得SODtN收率為5

3、8％，比活力7357.224U/mg，經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳分析，純化的豬血Cu/Zn-SOD達到電泳純。 對純化的豬血Cu/Zn-SOD的理化性質(zhì)進行分析，結(jié)果表明：豬血Cu/Zn-SOD亞基分子量為16.069kDa，分子量為32.138kDa。同時發(fā)現(xiàn)超氧化物歧化酶是一種對熱和酸堿度穩(wěn)定性較好的酶。溫度在低于60℃時，豬血Cu/Zn-SOD活性相對穩(wěn)定。在pH5.0～9.0條件下，酶的活力相對穩(wěn)定，并且在pH7.0～8.0時