苦瓜藤多糖的分離純化及理化性質(zhì)和單糖組成研究.pdf

1、在我國，苦瓜藤來源豐富、藥用價值較高?？喙咸俣嗵?MVP)是苦瓜藤的主要功效成分之一，研究苦瓜藤多糖的分離純化工藝及其理化性質(zhì)和單糖組成，對苦瓜藤的開發(fā)利用具有重要意義。
　　 本文研究了苦瓜藤多糖的分離純化工藝，測定分析苦瓜藤多糖的理化性質(zhì)和單糖組成，研究結(jié)果和結(jié)論如下:
　　 苦瓜藤經(jīng)過干燥粉碎處理后，超聲波輔助水提取或普通熱水提取，得到苦瓜藤粗多糖水溶液，采用苯酚-硫酸法測定粗多糖含量，并進(jìn)一步計算粗多糖提取率。通

2、過單因素和正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化其兩種提取工藝的參數(shù)，比較兩種最佳工藝的多糖提取率。結(jié)果表明，超聲波輔助提取時，影響多糖得率的主次因素為:溫度＞超聲時間＞pH＞料液比，經(jīng)過L9(34)正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化得到的苦瓜藤多糖的最優(yōu)提取參數(shù)為:提取溫度65±2℃、料液比1∶25(g/mL)、超聲時間35min、pH為7，提取兩次，多糖得率可達(dá)到3.08％;普通熱水提取時，影響大小為:料液比＞浸提溫度＞浸提時間，經(jīng)過L9(33)正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化得到的苦瓜藤多糖的最優(yōu)

3、提取參數(shù)為:提取溫度75±2℃、料液比1∶55(g/mL)、提取時間90min，浸提2次。與普通水提法相比，超聲一次提取效率約為水提法的2.5倍。
　　 醇沉粗多糖加水復(fù)溶后，采用Sevag試劑和LSA-10樹脂對其進(jìn)行脫蛋白處理。采用苯酚-硫酸法測定處理前后的多糖液多糖含量，計算其多糖損失率;采用考馬斯亮藍(lán)法測定處理前后的多糖液蛋白質(zhì)含量，計算其脫蛋白效率。最后對兩種方法除蛋白質(zhì)后的糖液進(jìn)行紫外光譜掃描，鑒定其脫蛋白效果，綜合

4、比較兩種脫蛋白工藝。結(jié)果得出，Sevag法去除蛋白質(zhì)不完全，5次處理后，蛋白的總脫除率為55.99％，苦瓜藤多糖的損失率為48.81％; LSA-10的除蛋白率為83％，同時苦瓜藤多糖的損失率為3.02％，相較Sevag法脫蛋白，除蛋白質(zhì)率高，而且多糖損失率較低?？梢姡琇SA-10大孔樹脂對于游離蛋白和糖蛋白綴合物的吸附具有良好的選擇性，比較適合MVP脫蛋白。在對兩種方法去蛋白質(zhì)后的糖液進(jìn)行紫外光譜掃描發(fā)現(xiàn)，兩種方法處理后都還存在極弱的

5、蛋白質(zhì)吸收。
　　 采用大孔樹脂吸附法對脫蛋白多糖進(jìn)行脫色處理，研究五種樹脂DA-201、LSA-10、D-101、AB-8、XDA-6靜態(tài)吸附色素和多糖的能力，采用紫外分光法測定色素含量，苯酚-硫酸法測定多糖含量，并通過綜合評價機(jī)制選出除色素的最優(yōu)樹脂，應(yīng)用動態(tài)吸附法除去多糖液色素。結(jié)果表明，LSA-10的F值最大，可作為除色素的最優(yōu)樹脂。通過LSA-10動態(tài)脫色的研究，發(fā)現(xiàn)LSA-10樹脂除色素能力為77.85％。
　

6、　 在苦瓜藤多糖的純化分離研究中，應(yīng)用DEAE-52 Cellulose、Sephadex G-200柱層析分離純化苦瓜藤多糖。在DEAE-52 Cellulose柱層析時，先用蒸餾水洗脫再用0.15 mol/L、0.3mol/L氯化鈉溶液等度洗脫，苯酚-硫酸法跟蹤檢測;分離得到的組份再經(jīng)Sephadex G-200柱層析純化以確保得到純品。結(jié)果表明，苦瓜藤多糖在0.15mol/L的氯化鈉濃度下便可以被全部洗脫出柱，得到兩個主要的多糖

7、組分中性多糖MVP-1和酸性多糖MVP-2;兩種多糖組分經(jīng)Sephadex G-200柱層析進(jìn)一步純化，初步判斷MVP-1和MVP-2均為比較單一的多糖，這表明DEAE-52纖維素分離純化效果佳。
　　 采用蒽酮-硫酸法、硫酸-咔唑法、考馬斯亮藍(lán)法、碘-碘化鉀法等顏色反應(yīng)分析苦瓜藤多糖的理化性質(zhì)，采用氣相色譜、分子表征系統(tǒng)及紅外光譜分別分析苦瓜藤多糖的單糖組成、分子量和結(jié)構(gòu)。結(jié)果得出，MVP-1和MVP-2均為無結(jié)合蛋白質(zhì)的非淀

8、粉均一多糖;MVP-1和MVP-2的單糖組成成份相似，至少由五種單糖組成，分別是:鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖，MVP-1的單糖組成大致比例為:Gal∶ Man∶ Glu∶ Rha∶ Ara=1∶0.92∶0.54∶0.43∶0.21;MVP-2的單糖組成大致比例為:Gal∶ Man∶ Glu∶ Ara∶ Rha=1∶0.71∶0.63∶0.32∶0.27; BI-MwA/BI-DNDC絕對分子量表征系統(tǒng)測得MVP-1的Mw