巢湖藍(lán)藻多糖的分離、純化及理化性質(zhì)研究.pdf

1、銅綠微囊藻是巢湖水華藍(lán)藻主要組成藻類，其含量能夠達(dá)到98％以上。銅綠微囊藻在腐殖化過程中會釋放大量的有毒有害物質(zhì)，這對巢湖水體及周圍環(huán)境造成了嚴(yán)重的環(huán)境污染。在直接打撈水華藍(lán)藻仍是治理巢湖富營養(yǎng)化的有效方法前提下，如何充分利用打撈上來的水華藍(lán)藻是擺在人們面前的難題。本文從水華藍(lán)藻中提取多糖這一生理活性物質(zhì)，這為水華藍(lán)藻處理提供了一條變廢為寶、提高綜合治理效益的有效新途徑。
　　本論文以直接打撈的巢湖水華藍(lán)藻為研究對象，采用反復(fù)凍融

2、3次破壁，并通過飽和度為100的硫酸銨溶液去除蛋白質(zhì)，粗多糖經(jīng)過DEAE-52和SephadexG150分離純化其中的水溶性酸性多糖。通過響應(yīng)面曲線法確定藍(lán)藻多糖的最佳提取優(yōu)化條件;對純化過后的藍(lán)藻多糖進(jìn)行相關(guān)性質(zhì)和結(jié)構(gòu)方面的鑒定和體外抗氧化研究，主要結(jié)論如下:
　　1.比較了反復(fù)凍融法和溶菌酶法對藍(lán)藻細(xì)胞壁的破除效果，結(jié)果表明反復(fù)凍融法的破除效果強(qiáng)于溶菌酶法。正交試驗(yàn)優(yōu)化提取條件:采用水提醇沉法提取打撈的巢湖水華藍(lán)藻中的多糖，并

3、通過提取料液比、提取溫度、提取時間三個單因素影響試驗(yàn)，確定中心組合實(shí)驗(yàn)影響因素和水平;最后通過中心組合試驗(yàn)并采用相應(yīng)面分析的方法確定藍(lán)藻粗多糖最佳提取工藝:提取溫度53℃、提取時間4.3h、提取料液比1∶51。
　　2.比較了硫酸銨除蛋白和Savage除蛋白效果。硫酸銨除蛋白效果明顯強(qiáng)于Savage法，而且過程中不會使用和產(chǎn)生有毒有害物質(zhì)。多糖粗提物經(jīng)過硫酸銨除蛋白（飽和度為100），多糖粗提物中93％以上的蛋白質(zhì)含量被去除得到粗

4、多糖。
　　3.藍(lán)藻粗多糖通過DEAE-52纖維素柱交換層析，NaCl洗脫得到酸性藍(lán)藻多糖，透析袋除鹽后通過Sephadex G150葡聚糖凝膠柱純化得到相對均一酸性藍(lán)藻多糖CHAP。
　　4.CHAP的紫外光譜表明CHAP不含蛋白質(zhì)和核酸，紅外光譜掃描結(jié)果表明CHAP是吡喃糖并具有α-D-半乳吡喃糖的特征吸收峰。高效液相測定CHAP的分子量為2.209×105，其圖譜同時也表明CHAP組分較均一。離子色譜表明CHAP由6.

5、36％的阿拉伯糖、35.47％的葡萄糖、5.03％的木糖、17.09％的半乳糖、27.36％的甘露糖及一種未知單糖構(gòu)成。通過高碘酸氧化有甲酸生成，說明含有1-4或1-6糖苷鍵，從其生成量來看說明CHAP結(jié)構(gòu)中分支較多。甲酸生成量大約是高碘酸的消耗量的二分之一，可以推測此多糖為分支或1→6連接較多的結(jié)構(gòu)，也可能存在不少只消耗高碘酸并不產(chǎn)生甲酸的1→2或1→4鍵型。
　　5.體外抗氧化實(shí)驗(yàn)結(jié)果:CHAP對DPPH和超氧自由基有較強(qiáng)的清