海蜇糖蛋白分離純化、理化性質(zhì)及結(jié)構(gòu)特點(diǎn)研究.pdf

1、海蜇（Rhopilema esculehtum Kishinouye）是生長(zhǎng)在海洋中營(yíng)浮游生活的大型食用、暖水性水母類，在南海、東海、黃海、渤海海域有著廣泛的資源分布，種類繁多，資源十分宏厚，我國(guó)年產(chǎn)量為30萬(wàn)噸左右，海蜇作為藥食兩用的海產(chǎn)品，不僅為人們提供了豐富的營(yíng)養(yǎng)，還一直為古醫(yī)書(shū)所記載。但是，目前海蜇的開(kāi)發(fā)利用僅僅停留在腌制或者簡(jiǎn)單的烹調(diào)階段而少有對(duì)海蜇進(jìn)行深加工和研究，導(dǎo)致資源的浪費(fèi)。本文從海蜇中提取糖蛋白，純化得到純的海蜇糖蛋

2、白，并對(duì)其理化性質(zhì)及結(jié)構(gòu)特點(diǎn)進(jìn)行研究。本文對(duì)海蜇的研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下：
　　1.響應(yīng)面法優(yōu)化海蜇糖蛋白的提取工藝：在單因素試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，利用Design V8.0.6設(shè)計(jì)Box-Behnken試驗(yàn)，結(jié)果得到提取海蜇糖蛋白的最佳工藝條件為：NaCl濃度為0.57mol/L，浸提時(shí)間為12.50h，料液比為1:5.50，超聲破碎時(shí)間為20.00min，超聲破碎功率為275.00W；在此提取條件下的得率為：總蛋白含量為19.89％，

3、總糖含量為2.86%，糖蛋白提取得率為9.14%。
　　2.海蜇糖蛋白的分離純化及電泳鑒定：經(jīng)過(guò)提取得到的粗糖蛋白先經(jīng)過(guò) SP SepharoseFF陰離子凝膠分離得到半純品JGP-Ⅲ，再經(jīng)過(guò)Sephacryl S-300 HR凝膠柱層析純化得到海蜇糖蛋白純品JGP-Ⅲ-Ⅱ，經(jīng)過(guò)Sephacryl S-300 HR凝膠柱層析鑒定得到單一對(duì)稱的峰，說(shuō)明 JGP-Ⅲ-Ⅱ的成分較單一，純化得率為1.80%；SDS-PAGE電泳試驗(yàn)后，同

4、時(shí)采用考馬斯亮藍(lán)染色和 PAS糖染色兩種染色方法，證明了JGP-Ⅲ-Ⅱ?yàn)樘堑鞍?，其相?duì)分子質(zhì)量為41.53KD。
　　3. JGP-Ⅲ-Ⅱ的理化性質(zhì)：HPLC分析得到單一對(duì)稱的峰，連接示差檢測(cè)器后再次證明 JGP-Ⅲ-Ⅱ?yàn)樘堑鞍祝?HPLC測(cè)得 JGP-Ⅲ-Ⅱ相對(duì)分子質(zhì)量為44.196KD，與 SDS-PAGE測(cè)定結(jié)果不顯著，且其純度為98.25%；熱穩(wěn)定試驗(yàn)測(cè)得JGP-Ⅲ-Ⅱ熱變性溫度為53.6℃，熱收縮溫度為92℃，糖鏈的存在

5、對(duì)其熱穩(wěn)定性起到增強(qiáng)的作用；氨基酸分析表明，JGP-Ⅲ-Ⅱ中含有16中氨基酸，其中7種是人體必需氨基酸，甘氨酸、纈氨酸和谷氨酸為主要成分；PMP柱前衍生化HPLC法測(cè)定顯示，JGP-Ⅲ-Ⅱ單糖成分為甘露糖、2-氨基-D-葡萄糖、氨基半乳糖、乳糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、巖藻糖，含量比例為：6.44:4.80:4.86:66.24:1.38:1.96:6.17:1.63。
　　4.JGP-Ⅲ-Ⅱ的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：利用β-消除反應(yīng)和PNGas