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文檔簡介
1、盡管有大量的證據(jù)支持leptin調(diào)節(jié)生殖功能的角色,然而leptin究竟是直接還是間接調(diào)節(jié)下丘腦—垂體—性腺軸,仍舊需要更多的工作去闡明.因此,本實驗研究leptin對生殖軸中下丘腦的可能作用,期望通過觀察leptin對下丘腦神經(jīng)肽Y神經(jīng)元(Neuropeptide Y, NPY)表達的影響,能夠初步探討leptin調(diào)控生殖的可能作用機理,為leptin的臨床應(yīng)用提供一定的實驗依據(jù).研究內(nèi)容與結(jié)果如下:一、obR與NPY在小鼠下丘腦的共
2、表達目的:leptin是連接營養(yǎng)與生殖的代謝信號,在生殖軸中發(fā)揮重要作用.由于未能發(fā)現(xiàn)obR和obRmRNA與GnRH神經(jīng)元在中樞的共性表達,大多數(shù)學(xué)者認為leptin是間接作用于GnRH神經(jīng)元影響其分泌,而NPY是目前研究最多的參與能量平衡和神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)控的重要調(diào)質(zhì),推測NPY可能介導(dǎo)了leptin和GnRH神經(jīng)元之間的調(diào)節(jié)作用.所以實驗中我們首先觀察obR與NPY在小鼠下丘腦的分布,然后進一步觀察兩者在下丘腦的是否有共存情況,并以此
3、作為下一步實驗設(shè)計的依據(jù).二、側(cè)腦室注射瘦素對小鼠下丘腦神經(jīng)肽Y表達的影響目的:由于沒有觀察到obR與GnRH神經(jīng)元在中樞的共性表達,因而大多學(xué)者更傾向于leptin通過其他下丘腦神經(jīng)肽間接作用于GnRH神經(jīng)元而影響其分泌的觀點.從前面的實驗結(jié)果,已知在小鼠下丘腦ARC區(qū)NPY神經(jīng)元上有obR的表達,結(jié)合其他學(xué)者的實驗結(jié)果,我們認為NPY神經(jīng)元在其中起到中間介質(zhì)的重要作用.本實驗采用側(cè)腦室微量注射Leptin,觀察在注射不同時間后Lep
4、tin對小鼠血清卵泡刺激素(Follicle stimulatinghormone,FSH)與黃體生成素(luteinizing hormone,LH)的影響,以及同步的下丘腦NPY神經(jīng)元表達的影響,期望能得知Leptin究竟是通過抑制還是促進NPY神經(jīng)元的表達而影響GnRH神經(jīng)元的分泌.并且期望通過研究Leptin對下丘腦NPY神經(jīng)元的影響,能夠初步探討leptin調(diào)節(jié)GnRH神經(jīng)元分泌的作用機理,為Leptin的臨床應(yīng)用進行前期的基
5、礎(chǔ)研究.三、Leptin對下丘腦NPY神經(jīng)元表達影響的體外實驗?zāi)康?神經(jīng)組織的培養(yǎng)歷史自最初的組織塊培養(yǎng)發(fā)展至現(xiàn)在的分散細胞培養(yǎng)和單一細胞培養(yǎng)已有九十多年的歷史.由于體外培養(yǎng)具有易于控制實驗條件和因素,易獲得活體觀察結(jié)果等優(yōu)點,并且與分子生物學(xué)等技術(shù)相結(jié)合,成為研究神經(jīng)內(nèi)分泌的有效實驗方法.下丘腦由于核團多、結(jié)構(gòu)復(fù)雜,在體研究有一定難度,因而許多學(xué)者建立了體外培養(yǎng)技術(shù).從前期的實驗研究中得知leptin在刺激OEP小鼠血清FSH和LH濃
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