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文檔簡介
1、利用人工合成家蠶Bombyx mori抑前胸腺肽(prothoracicostatic peptide,Bom-PTSP),其一級結(jié)構(gòu)為AWQDLNASAW-NH<,2>分子量為1089.78Da,用不同載體(BSA或OVA)經(jīng)戊二醛一步法偶聯(lián)得到免疫抗原(BSA-PTSP)和檢測抗原(OVA-PTSP),常規(guī)免疫BALB/c小鼠.經(jīng)Dot Blot和間接ELISA法檢測,得到對PTSP有很強免疫應(yīng)答的小鼠,取其脾臟細胞和小鼠骨髓瘤細胞
2、Sp2/0在50％PEG的介導(dǎo)下進行細胞融合.此外,利用CLONTECH的"SMART cDNA Synthesis bv Primer Extension"技術(shù),構(gòu)建了蓖麻蠶幼蟲5齡2天腦的cDNA文庫,并用抗PTSP的多抗血清對該文庫進行了免疫篩選,初步得到了與抗PTSP多抗血清有免疫反應(yīng)的陽性克隆.對所得到的陽性克隆可以對其進行亞克隆,通過PCR和RACE技術(shù)克隆出蓖麻蠶中類PTSP功能的基因,以便對其進行深一步的研究.對PTSP
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