檳榔堿對大鼠結腸平滑肌鉀、鈉和鈣通道m(xù)RNA表達的調節(jié)作用研究.pdf

1、檳榔堿是從檳榔中提取的生物堿，為M膽堿受體激動劑。檳榔堿作用于細胞膜，可與相應受體結合，通過蛋白偶聯后開放細胞膜離子通道，增加細胞內鈣離子濃度，對結腸運動具有一定的促進作用。大量的研究表明，離子通道的調控異?？蓪е挛改c道動力障礙。因此，研究檳榔堿對結腸平滑肌離子通道表達的影響對結腸運動功能障礙具有重要意義。本實驗通過研究離子通道在基因水平上即mRNA表達的影響，進一步分析檳榔堿從分子水平上對平滑肌細胞的影響及作用機制。
　　 目

2、的：
　　 本課題運用分子生物學方法，研究檳榔堿對大鼠結腸平滑肌運動的調節(jié)作用，說明藥物對離子通道m(xù)RNA表達的影響，闡釋檳榔堿對大鼠結腸平滑肌細胞運動的分子生物學機制，從分子生物學上驗證對結腸動力促進的作用，為進一步闡釋檳榔堿對細胞內信號傳導及腸道動力的調節(jié)研究提供新思路，具有臨床應用前景。
　　 方法：
　　 本研究以健康標準體重30只Wistar大鼠為研究對象，正常飼養(yǎng)適應環(huán)境1周后，隨機分為4組：實驗組（

3、各8只），分別給以不同濃度檳榔堿（高、中、低濃度）灌胃：對照組6只，生理鹽水灌胃。均自由進飲食，分籠喂養(yǎng)于20-25℃明暗各12小時的動物實驗室內，飼養(yǎng)三周后禁食不禁水12小時，稱重并用10％水合氯醛(5ml/kg)腹腔注射致死，迅速解剖大鼠的末段結腸并游離平滑肌，生理鹽水沖洗后冰上操作，提取RNA，逆轉錄后用β-actin、鈣離子激活性鉀通道、電壓依賴性鈉通道β2亞基、L型鈣通道α亞基引物擴增，跑電泳，EB染色后用BN-TA2020D

4、全自動凝膠成像分析儀觀察，與對照組對比分析，用SPSS軟件分析各組表達有無差異，根據電泳結果的變化說明藥物對離子通道m(xù)RNA表達的影響。
　　 結果：
　　 1、鈣離子激活性鉀通道m(xù)RNA實驗組與對照組表達無明顯差異(P＞0.05)，高、中、低濃度實驗組內表達無明顯差異(P＞0.05)。
　　 2、電壓依賴性鈉通道m(xù)RNA實驗組與對照組表達無明顯差異(P＞0.05)，高、中、低濃度實驗組內表達無明顯差異(P＞0.

5、05)。
　　 3、L型鈣通道m(xù)RNA表達，不同濃度灌胃組鈣離子通道m(xù)RNA表達有明顯差異(P＜0.01)；實驗組與低濃度組無明顯差異(P＞0.05)，中濃度組與高濃度組較對照組、低濃度組表達明顯增高，有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，但高濃度組較中濃度組表達無明顯增高(P＞0.05)。
　　 結論：
　　 1、用不同濃度的藥物給大鼠灌胃，使大鼠體內藥物濃度不同，方法簡單易行，對大鼠損害、刺激小，無明顯機體不良反應。

6、
　　 2、mRNA的測定是在分子水平上研究基因表達的常用方法，RT-PCR則以其靈敏度高、專一性好、快速簡單的特點，可用來作為mRNA檢測的方法。
　　 3、高濃度、中濃度檳榔堿灌胃可以上調L型鈣通道m(xù)RNA表達，但是低濃度檳榔堿對其影響不大；不同濃度檳榔堿灌胃對鈣離子激活型鉀通道及電壓依賴性鈉通道無明顯上調作用。
　　 4、L型鈣通道與細胞收縮有直接關系，以往研究證實檳榔堿可以升高細胞內Ca2+濃度，并促進平