檳榔堿對大鼠結(jié)腸平滑肌鉀、鈉和鈣通道m(xù)RNA表達(dá)的調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、檳榔堿是從檳榔中提取的生物堿，為M膽堿受體激動劑。檳榔堿作用于細(xì)胞膜，可與相應(yīng)受體結(jié)合，通過蛋白偶聯(lián)后開放細(xì)胞膜離子通道，增加細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度，對結(jié)腸運(yùn)動具有一定的促進(jìn)作用。大量的研究表明，離子通道的調(diào)控異常可導(dǎo)致胃腸道動力障礙。因此，研究檳榔堿對結(jié)腸平滑肌離子通道表達(dá)的影響對結(jié)腸運(yùn)動功能障礙具有重要意義。本實驗通過研究離子通道在基因水平上即mRNA表達(dá)的影響，進(jìn)一步分析檳榔堿從分子水平上對平滑肌細(xì)胞的影響及作用機(jī)制。
　　 目

2、的：
　　 本課題運(yùn)用分子生物學(xué)方法，研究檳榔堿對大鼠結(jié)腸平滑肌運(yùn)動的調(diào)節(jié)作用，說明藥物對離子通道m(xù)RNA表達(dá)的影響，闡釋檳榔堿對大鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞運(yùn)動的分子生物學(xué)機(jī)制，從分子生物學(xué)上驗證對結(jié)腸動力促進(jìn)的作用，為進(jìn)一步闡釋檳榔堿對細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)及腸道動力的調(diào)節(jié)研究提供新思路，具有臨床應(yīng)用前景。
　　 方法：
　　 本研究以健康標(biāo)準(zhǔn)體重30只Wistar大鼠為研究對象，正常飼養(yǎng)適應(yīng)環(huán)境1周后，隨機(jī)分為4組：實驗組（

3、各8只），分別給以不同濃度檳榔堿（高、中、低濃度）灌胃：對照組6只，生理鹽水灌胃。均自由進(jìn)飲食，分籠喂養(yǎng)于20-25℃明暗各12小時的動物實驗室內(nèi)，飼養(yǎng)三周后禁食不禁水12小時，稱重并用10％水合氯醛(5ml/kg)腹腔注射致死，迅速解剖大鼠的末段結(jié)腸并游離平滑肌，生理鹽水沖洗后冰上操作，提取RNA，逆轉(zhuǎn)錄后用β-actin、鈣離子激活性鉀通道、電壓依賴性鈉通道β2亞基、L型鈣通道α亞基引物擴(kuò)增，跑電泳，EB染色后用BN-TA2020D

4、全自動凝膠成像分析儀觀察，與對照組對比分析，用SPSS軟件分析各組表達(dá)有無差異，根據(jù)電泳結(jié)果的變化說明藥物對離子通道m(xù)RNA表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1、鈣離子激活性鉀通道m(xù)RNA實驗組與對照組表達(dá)無明顯差異(P＞0.05)，高、中、低濃度實驗組內(nèi)表達(dá)無明顯差異(P＞0.05)。
　　 2、電壓依賴性鈉通道m(xù)RNA實驗組與對照組表達(dá)無明顯差異(P＞0.05)，高、中、低濃度實驗組內(nèi)表達(dá)無明顯差異(P＞0.

5、05)。
　　 3、L型鈣通道m(xù)RNA表達(dá)，不同濃度灌胃組鈣離子通道m(xù)RNA表達(dá)有明顯差異(P＜0.01)；實驗組與低濃度組無明顯差異(P＞0.05)，中濃度組與高濃度組較對照組、低濃度組表達(dá)明顯增高，有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，但高濃度組較中濃度組表達(dá)無明顯增高(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、用不同濃度的藥物給大鼠灌胃，使大鼠體內(nèi)藥物濃度不同，方法簡單易行，對大鼠損害、刺激小，無明顯機(jī)體不良反應(yīng)。

6、
　　 2、mRNA的測定是在分子水平上研究基因表達(dá)的常用方法，RT-PCR則以其靈敏度高、專一性好、快速簡單的特點，可用來作為mRNA檢測的方法。
　　 3、高濃度、中濃度檳榔堿灌胃可以上調(diào)L型鈣通道m(xù)RNA表達(dá)，但是低濃度檳榔堿對其影響不大；不同濃度檳榔堿灌胃對鈣離子激活型鉀通道及電壓依賴性鈉通道無明顯上調(diào)作用。
　　 4、L型鈣通道與細(xì)胞收縮有直接關(guān)系，以往研究證實檳榔堿可以升高細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度，并促進(jìn)平