東北虎金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌混合感染的診斷與病原分離鑒定.pdf

1、東北虎(Panthera tigris altaica)又稱西伯利亞虎，它屬于哺乳綱、食肉目、貓科、豹屬、虎種。野生東北虎主要分布在我國(guó)東北部的長(zhǎng)白山、完達(dá)山和小興安嶺等地。東北虎屬中國(guó)Ⅰ級(jí)保護(hù)動(dòng)物，具有極高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，但它的繁殖率很低，所以目前主要采用人工飼養(yǎng)。
　　自2011年7月5日起，延吉市動(dòng)物園的一只3歲雌性東北虎出現(xiàn)食欲減退，不愿活動(dòng)，精神萎靡等臨床癥狀，一周后死亡。為了明確死亡原因，對(duì)死亡東北虎進(jìn)行了一系列的實(shí)驗(yàn)室診

2、斷，最終確定了該東北虎的死亡原因。
　　本試驗(yàn)對(duì)死亡東北虎進(jìn)行了剖檢，取其心、肝、脾、肺、腎，切成大小為0.5 cm3的組織塊，制作石蠟切片。切片制好后對(duì)其進(jìn)行HE染色及固封，用顯微鏡觀察結(jié)果。發(fā)現(xiàn)心組織心肌呈小灶性壞死，心肌纖維粗細(xì)不勻，毛細(xì)血管充血；肝組織肝小葉分界不明顯，肝竇和肝索分界不清晰，可見(jiàn)局灶性出血灶；脾組織脾髓內(nèi)充盈大量血液，脾實(shí)質(zhì)細(xì)胞因彌漫性的壞死、崩解而明顯減少；肺組織肺泡膈、小葉間質(zhì)內(nèi)血管充血出血、水腫；腎組

3、織髓質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)充血和出血，腎小管上皮脫落。
　　從東北虎的肝臟中分離出了兩種細(xì)菌，一種菌革蘭氏染色呈陽(yáng)性，顯微鏡下觀察菌體呈球形，有的單個(gè)或成對(duì)排列，有的則呈葡萄狀排列，無(wú)莢膜和芽胞。在普通瓊脂平板上，菌落呈圓形、不透明、邊緣整齊、表面隆起、濕潤(rùn)的光滑菌落。在血液瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基上，形成明顯的溶血。另一種菌革蘭氏染色呈陰性，顯微鏡下觀察菌體呈短桿狀，無(wú)芽孢、無(wú)莢膜。在普通瓊脂培養(yǎng)基上，菌落呈圓形、濕潤(rùn)、半透明、邊緣整齊、表面隆起的光滑

4、菌落。在SS瓊脂培養(yǎng)基和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上，菌落呈圓形、濕潤(rùn)、粉色、邊緣整齊、表面隆起的光滑菌落。在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上，菌落呈圓形、濕潤(rùn)、黑色帶金屬光澤、邊緣整齊、表面隆起的光滑菌落。
　　對(duì)分離得到的兩種菌進(jìn)行生化試驗(yàn)，結(jié)果顯示，菌1為 H2O2酶試驗(yàn)為陽(yáng)性、三糖鐵試驗(yàn)為陽(yáng)性、甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)為陽(yáng)性、凝固酶試驗(yàn)為陽(yáng)性；菌2三糖鐵試驗(yàn)為陽(yáng)性、甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)為陽(yáng)性。
　　用細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒提取兩種細(xì)菌的DNA，進(jìn)行PCR

5、鑒定和測(cè)序。兩株菌序列比對(duì)結(jié)果信息顯示，菌1為球菌序列，菌2為桿菌序列。綜合上述試驗(yàn)結(jié)果，確定了菌1為金黃色葡萄球菌，菌2為大腸埃希菌。
　　分別用兩種菌注射小白鼠，每種菌各注射4只，結(jié)果8只小白鼠在24 h內(nèi)全部死亡。從死亡小鼠的肝臟及脾臟中分離出的細(xì)菌與從老虎肝臟中分離出的細(xì)菌一致，說(shuō)明這兩種菌都具有致病性。
　　通過(guò)藥敏試驗(yàn)分析金黃色葡萄球菌對(duì)哌拉西林、頭孢曲松、頭孢噻虧、氧氟沙星、丁胺卡那、頭孢哌酮、萬(wàn)古霉素、苯唑青