姜黃素對(duì)血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的培養(yǎng)心肌細(xì)胞血凝素樣氧化低密度脂蛋白受體-1(LOX-1)mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的:通過體外培養(yǎng)SD大鼠乳鼠心肌細(xì)胞,給與藥物(姜黃素)及相應(yīng)抗體的作用后,加以血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo),觀察藥物組、抗體組及陰性對(duì)照組、陽性對(duì)照組之間血凝素樣氧化低密度脂蛋白受體-1(LOX-1)的mRNA表達(dá)的差異,從而證明姜黃素對(duì)心肌細(xì)胞LOX-1表達(dá)的影響,并進(jìn)一步探討這種作用對(duì)于某些心血管疾病可能的預(yù)防及延緩作用。
　　方法:實(shí)驗(yàn)于2010年3月至2010年9月在安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院動(dòng)物房手術(shù)中心及中心實(shí)驗(yàn)室完成。①取6-

2、10只SPF級(jí)SD大鼠新生乳鼠(1-2天),取出心臟,采用分次消化方法提取心肌細(xì)胞,采用DMEM/F12加10％小牛血清作為培養(yǎng)基,培養(yǎng)原代心肌細(xì)胞。②培養(yǎng)48小時(shí)后更換為不含血清的DMEM/F12培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)。③將培養(yǎng)細(xì)胞分為A、B、C、D4組,分別為A組陰性對(duì)照組,B組血管緊張素Ⅱ組,C組血管緊張素Ⅱ+LOX-1抗體組,D組血管緊張素Ⅱ+姜黃素組。④更換無血清培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí),將C組的培養(yǎng)液換成含有10μg/mlL

3、OX-1抗體的含藥培養(yǎng)液,將D組細(xì)胞的培養(yǎng)液更換成含有5μmol/L姜黃素的含藥培養(yǎng)液,作用3h。3h后更換B、C、D組細(xì)胞的培養(yǎng)液,換成含有0.1μmol/L血管緊張素Ⅱ的含藥培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)24h。⑤藥物作用24小時(shí)后收集細(xì)胞,用Trizol試劑提取細(xì)胞總RNA,采用RT-PCR檢測(cè)每組細(xì)胞LOX-1mRNA的含量。RT-PCR結(jié)果通過凝膠成像處理系統(tǒng)做積分吸光度測(cè)定和分析,以各組目的基因擴(kuò)增條帶的吸光度值與內(nèi)參β-actin條帶的

4、吸光度值之比作為目標(biāo)mRNA的表達(dá)量。
　　結(jié)果:①實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次,體外培養(yǎng)的乳鼠原代心肌細(xì)胞存活良好,以0.4%的臺(tái)盼蘭染液染色后計(jì)數(shù),細(xì)胞存活率約為95%-97%。每個(gè)高倍鏡視野均可見70%-80%細(xì)胞有節(jié)律搏動(dòng),單個(gè)細(xì)胞搏動(dòng)頻率8-70次/分不等,細(xì)胞密度較大部位搏動(dòng)較為一致,頻率為30-70次/分。②血管緊張素Ⅱ可以明顯上調(diào)心肌細(xì)胞表面LOX-1的表達(dá),與陰性對(duì)照組比較,P<0.05。③一定濃度的姜黃素可以有效阻止血管緊張素