細胞自噬對骨折愈合影響的體內(nèi)研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分進行論述：
　　第一部分 研究骨折斷端骨組織細胞自噬水平的改變
　　目的:研究骨折斷端骨組織細胞自噬水平的改變。
　　方法:成年雄性SD大鼠36只納入此項研究。實驗設計兩個組，實驗組:通過對30只SD大鼠行右股骨干中段骨折手術制作簡單橫行骨折模型，并分別于術后6小時、12小時、24小時、3天和1周各時間點處死5只大鼠摘取標本行免疫熒光檢測骨折斷端處組織內(nèi)LC3-Ⅱ蛋白表達變化;對照組:摘取右股骨中

2、段骨標本行LC3-Ⅱ免疫熒光檢測。
　　結(jié)果:免疫熒光染色檢測結(jié)果顯示，各組的LC3-Ⅱ蛋白表達均定位于細胞質(zhì)中，對照組LC3-Ⅱ蛋白呈散在表達，實驗組各時間點所測得LC3-Ⅱ蛋白表達均高于對照組(P＜0.05)，且隨時間進展實驗組LC3-Ⅱ蛋白表達也呈動態(tài)變化。
　　結(jié)論:骨折可造成創(chuàng)傷周圍的骨組織細胞內(nèi)自噬水平較正常時明顯升高。
　　第二部分 通過調(diào)控骨折大鼠體內(nèi)的自噬通路水平，以評價自噬水平改變對骨折愈合的影響<

3、br>　　目的:通過調(diào)控骨折大鼠體內(nèi)的自噬通路水平，以評價自噬水平改變對骨折愈合的影響。
　　方法:將189只成年雄性SD大鼠納入此實驗。通過對SD大鼠行右股骨干中段骨折造模手術后將其平均分為A、B、C三組，每組63只。A組（誘導自噬組）:于腹腔內(nèi)每日注射自噬誘導劑雷帕霉素(1mg/kg);B組（對照組）:每日腹腔內(nèi)注射與實驗組等量溶劑(0.4％DMSO，1.2ml/kg);C組（抑制自噬組）:每日于腹腔內(nèi)注射自噬抑制劑3-甲基腺

4、嘌呤(30mg/kg)。三組老鼠經(jīng)造模成功后第二天連續(xù)給藥至收集標本前一日，各組分別于第2、4、6周隨機選取5只大鼠行X線、Micro-CT觀察骨痂生長情況;選取6只大鼠行免疫熒光觀測LC3-Ⅱ蛋白表達和行免疫組化觀測Beclin-1蛋白表達來評價大鼠體內(nèi)自噬水平;選取5只大鼠行H&E染色觀察骨折斷端骨組織成骨細胞數(shù)量評價成骨活性;選取5只大鼠行Western Blot檢測評價血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達情況。
　　結(jié)果:免疫

5、熒光檢查顯示，各檢測時間點上A組LC3-Ⅱ蛋白在骨組織中表達明顯高于B、C兩組，C組LC3-Ⅱ蛋白表達較其它兩組明顯降低。三組行X線檢查后發(fā)現(xiàn)A、B兩組于造模2周后即開始有骨痂形成，而C組骨折線仍清晰可見，此外A組骨痂鈣化時間均早于B、C兩組。Micro-CT第6周結(jié)果顯示的平均骨小梁密度值:A組78.31±5.30、B組59.81±4.40，C組31.20±4.87，三組間差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。A、B、C三組標本第2周免疫