淫羊藿次苷Ⅱ抗乳腺癌機制研究.pdf

1、淫羊藿是應(yīng)用歷史悠久的傳統(tǒng)中藥，最近有研究報道其具有抗癌作用，為了尋找其中的抗腫瘤活性成分，本文應(yīng)用MTT法從10個來源于淫羊藿的黃酮類單體成分中，篩選出兩個能夠顯著抑制腫瘤細(xì)胞增殖的化合物，最終我們選擇了效果更優(yōu)的淫羊藿次苷Ⅱ（IcarisideⅡ，IcaS）進行進一步研究。MTT試驗表明：淫羊藿次苷Ⅱ可以呈劑量和時間依賴地抑制人乳腺癌MCF7和MDA-MB-231細(xì)胞的增殖，于是，我們以這兩種細(xì)胞為對象對淫羊藿次苷Ⅱ的抗腫瘤機制進行

2、了探討。
　　 從淫羊藿次苷Ⅱ?qū)?xì)胞形態(tài)和DNA分布的影響切入，發(fā)現(xiàn)該化合物能夠呈劑量和時間依賴地誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。所以，針對凋亡相關(guān)的不同信號通路和調(diào)控環(huán)節(jié)，本文對該化合物的作用機制進行了系統(tǒng)深入的研究。
　　 通過DAPI染色試驗和DNAladder試驗，我們觀察到淫羊藿次苷Ⅱ可以誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡，出現(xiàn)顯著的形態(tài)和生化特征改變，如染色質(zhì)濃縮、核碎裂、形成凋亡小體，細(xì)胞內(nèi)核小體DNA斷裂呈現(xiàn)典型的梯形條帶等。為了區(qū)分淫羊

3、藿次苷Ⅱ?qū)υ缙诘蛲龊屯砥诘蛲龅挠绊?，我們進行了annexin V-FITC/PI雙染色分析，結(jié)果表明：無論早期凋亡還是晚期凋亡的乳腺癌細(xì)胞．都隨淫羊藿次苷Ⅱ劑量的增加而增加。
　　 淫羊藿次苷Ⅱ能提高乳腺癌細(xì)胞內(nèi)Fas和Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域(Fas-associateddeath domain，F(xiàn)ADD)的表達水平，并活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶Caspase-8，證明淫羊藿次苷Ⅱ誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡有外源性死亡受體通路參與；淫羊藿次苷

4、Ⅱ能降低線粒體膜電位，促進膜間隙蛋白cytochrome c和凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)的釋放，并活化caspase-9，證明淫羊藿次苷Ⅱ誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡有內(nèi)源性線粒體通路參與。
　　 淫羊藿次苷Ⅱ增加促凋亡蛋白Bax和BimL的表達，但不影響抑凋亡蛋白Bc1-2，從而增加Bax/Bc1-2的比例，mRNA水平Bax/Bc1-2比例的變化和蛋白水平一致，說明淫羊藿次苷Ⅱ誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞凋亡受bc1-2家族調(diào)控。
　　 淫羊藿次

5、苷Ⅱ作用3小時，可以顯著抑制MCF7細(xì)胞中c-Raf和ERK1/2的磷酸化水平，提示淫羊藿次苷Ⅱ可能由MAPK通路介導(dǎo)，誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡。
　　 此外，我們還發(fā)現(xiàn)：淫羊藿次苷Ⅱ可以抑制MCF7和MDA-MB-231細(xì)胞的創(chuàng)傷愈合；可以抑制融合細(xì)胞Eahy926形成小管；并能抑制高侵襲性的MDA-MB-231細(xì)胞分泌基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)和穿過人工基底膜的能力。
　　 總之，淫羊藿次苷Ⅱ誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡涉及由Fas/F