淫羊藿素對(duì)雌激素依賴性乳腺癌細(xì)胞MCF-7作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究不同濃度的淫羊藿素(Icaritin,ICT)單獨(dú)應(yīng)用和與雌激素聯(lián)合應(yīng)用,對(duì)乳腺癌細(xì)胞 MCF-7的增殖和抑制作用,并分析該過程中雌激素受體ERα的表達(dá)情況,初步探討ICT的雌激素作用和抗雌激素作用發(fā)生的可能途徑,為可能尋找一個(gè)與手術(shù)配合來治療乳腺癌的方法提供理論依據(jù)。
　　方法:1.體外培養(yǎng)依賴雌激素的乳腺癌細(xì)胞MCF-7細(xì)胞,用不同濃度的ICT(10-10,10-9,10-8,10-7,10-6,5×10-6,10-

2、5),不同濃度的E2(10-13,10-12,10-11,10-10,10-9,10-8,10-7,10-6)以及10-9的 E2+不同濃度的ICT(10-7,10-6,5×10-6,10-5,5×10-5)分別作用于MCF-7細(xì)胞6天后,倒置顯微鏡下觀察MCF-7細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。
　　2.用不同濃度的 ICT(10-10,10-9,10-8,10-7,10-6,5×10-6,10-5,5×10-5),不同濃度的E2(10-13

3、,10-12,10-11,10-10,10-9,10-8,10-7,10-6)以及10-9的E2+不同濃度的ICT(10-8,10-7,10-6,5×10-6,10-5,5×10-5)分別作用于MCF-7細(xì)胞4天,5天,6天后,應(yīng)用MTT法檢測細(xì)胞增殖抑制的變化,并計(jì)算增殖率和抑制率。3.10-9的E2+不同濃度的ICT(10-7,10-6,5×10-6,10-5,)作用MCF-7細(xì)胞6天后,Hoechst33342染色觀察凋亡細(xì)胞,并

4、計(jì)算凋亡率。
　　4.淫羊藿素與雌二醇聯(lián)合應(yīng)用時(shí),用熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒檢測ERα報(bào)告基因表達(dá)活性。
　　5.RT-PCR檢測淫羊藿素和雌激素聯(lián)合應(yīng)用MCF-7細(xì)胞后,雌激素受體ERα表達(dá)的變化。
　　結(jié)果:1.雌激素單獨(dú)處理 MCF-7細(xì)胞后,細(xì)胞分裂相變多,部分細(xì)胞變?yōu)槎噙呅?隨著雌激素E2濃度的增加,細(xì)胞數(shù)量越來越多,當(dāng)E2濃度達(dá)到10-9時(shí),細(xì)胞無論從數(shù)量還是分裂相上都達(dá)到最大。之后細(xì)胞數(shù)量和分裂相又逐漸

5、變少。
　　2.淫羊藿素單獨(dú)處理MCF-7細(xì)胞后,細(xì)胞分裂相變多,部分細(xì)胞變?yōu)槎噙呅?隨著雌激素ICT濃度的增加,細(xì)胞數(shù)量越來越多,當(dāng)ICT達(dá)到10-5時(shí),細(xì)胞分裂相達(dá)到最大,之后細(xì)胞數(shù)量和分裂相又逐漸變少。
　　3.10-9E2+不同濃度的 ICT(10-7,10-6,5×10-6,10-5,)作用 MCF-7細(xì)胞后,細(xì)胞分裂相變少,部分細(xì)胞變圓,當(dāng)濃度為10-5時(shí),細(xì)胞漂浮和壞死現(xiàn)象最為明顯。
　　4.MTT比色法

6、測定結(jié)果顯示在淫羊藿素濃度10-6-5×10-5mol/l濃度范圍內(nèi)可以不同范圍的促進(jìn)MCF-7細(xì)胞增殖,當(dāng)淫羊藿素濃度為10-5mol/l,促增殖活性最為明顯。與雌激素E2相比,淫羊藿素具有較弱的雌激素活性。
　　5.淫羊藿素與雌二醇聯(lián)合應(yīng)用于 MCF-7細(xì)胞,MTT比色法測定結(jié)果顯示,當(dāng)濃度為10-9mol/l的E2與濃度大于10-9mol/l的ICT聯(lián)合應(yīng)用于MCF-7細(xì)胞時(shí), MCF-7細(xì)胞增值率明顯低于相同濃度的E2單獨(dú)

7、作用時(shí)。
　　6.ICT單獨(dú)應(yīng)用時(shí)能誘導(dǎo)ERα報(bào)告基因的表達(dá),當(dāng)ICT與E2合用時(shí),ICT對(duì)E2激活的ERα報(bào)告基因又抑制作用。
　　7.淫羊藿素與雌二醇聯(lián)合應(yīng)用于MCF-7細(xì)胞時(shí),RT-PCR檢測結(jié)果顯示能抑制ERα的表達(dá)。
　　結(jié)論:1.淫羊藿素在一定濃度范圍內(nèi)可以促進(jìn)MCF-7細(xì)胞增殖,具有一定的雌激素樣作用。
　　2.淫羊藿素與雌二醇聯(lián)合作用時(shí),可以拮抗前者的雌激素作用,抑制后者的促M(fèi)CF-7細(xì)胞增殖作用