Ophiobolin O抗人乳腺癌MCF-7細(xì)胞作用機(jī)制研究.pdf

1、文獻(xiàn)報(bào)道，2011年美國新發(fā)乳腺癌230480例，死亡39520例。乳腺癌是全球女性的健康殺手。因此對(duì)現(xiàn)有治療方法的優(yōu)化和研究新型藥物就顯得尤為重要。
　　 目前，乳腺癌的治療手段主要為手術(shù)治療，放療和化療。但是手術(shù)治療時(shí)，需要大面積的清掃乳癌周圍組織，術(shù)后的結(jié)果嚴(yán)重降低女性的生活質(zhì)量，基于此項(xiàng)原因，藥物的合理開發(fā)和應(yīng)用就迫在眉睫。早期主要應(yīng)用特異性內(nèi)分泌性抗乳癌藥物，具體分為以下幾種：一，雌激素受體抑制劑類(代表藥物：他莫昔芬

2、、氟維司群)；二，芳香類酶抑制劑類(代表：阿那曲唑、來曲唑、依西美坦)。他莫昔芬一直作為乳癌治療的金標(biāo)準(zhǔn)為廣大醫(yī)生和患者接受，但是近年來，不斷的出現(xiàn)耐藥病例，使得多種藥物聯(lián)用和新藥研發(fā)開始受到重視。
　　 本實(shí)驗(yàn)研究的化合物，OphiobolinO(蛇孢假殼素O)是首次從焦曲霉094102(Aspergillusustus094102)發(fā)酵物中發(fā)現(xiàn)了結(jié)構(gòu)新穎的蛇孢假殼素類二倍半萜烯化合物。文獻(xiàn)報(bào)道，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的30余種蛇孢假殼素類

3、化合物，具有廣譜的抗菌活性，如抗線蟲，抗真菌及抗細(xì)菌等，此外還對(duì)多種腫瘤具有顯著細(xì)胞毒活性。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)，蛇孢假殼素O能夠抑制多種腫瘤細(xì)胞的生長，如肺癌、肝癌、前列腺癌、乳腺癌，其中對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞的抑制作用尤其明顯。蛇孢假殼素O誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞早期凋亡以及G0/G1期細(xì)胞周期阻滯。隨后對(duì)作用機(jī)制進(jìn)行探討，細(xì)胞基因組途徑的應(yīng)答，整個(gè)過程通常需要幾個(gè)小時(shí)，而非基因組作用則快得多，在幾分鐘，甚至幾秒鐘之內(nèi)就能夠完成。PI3K/

4、AKT，MAPK等下游的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路受到激活，影響B(tài)cl-2家族蛋白、Cyclin家族蛋白以及更下游基因的表達(dá)，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和增殖。CyclinD1是一種細(xì)胞周期相關(guān)性蛋白，在促使細(xì)胞通過G1期檢驗(yàn)點(diǎn)，從G1進(jìn)入S期過程中發(fā)揮重要作用。同時(shí)cyclinD1也是一種雌激素反應(yīng)性基因，具有ERE元件，同樣的還有PR基因。我們觀察到在蛇孢假殼素O可以使得CyclinD1的Thr286磷酸化增加。CyclinD1的Thr286磷酸化是Cy

5、clinD1走向泛素化降解的標(biāo)志。因此，蛇孢假殼素O可能引起了CyclinD1磷酸化的降解增加，部分地解釋了蛇孢假殼素O存在的條件下引起的G1期阻滯。同時(shí)，蛇孢假殼素O激活MAPK通路關(guān)鍵蛋白JNK、p38、ERK等。ERK-MAPK的激活可能誘導(dǎo)了細(xì)胞凋亡。Bcl-2家族蛋白主要分為兩類，一類為抑制凋亡產(chǎn)生的蛋白，如Bcl-2；另一類為激活細(xì)胞凋亡的蛋白，如Bax。蛇孢假殼素O抑制Bcl-2蛋白的表達(dá)，刺激Bax蛋白的表達(dá)。Bax與B

6、cl-2比值上升通常被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡的一個(gè)指征。在此基礎(chǔ)上，本課題通過組織形態(tài)學(xué)觀察、MTT法、流式細(xì)胞術(shù)、RT-PCR、westernblot等多種手段，研究蛇孢假殼素O抗乳腺癌MCF-7細(xì)胞作用機(jī)制，探討其靶分子以及相關(guān)信號(hào)通路變化。通過研究，為乳腺癌治療提供新的可靠的潛在藥物。
　　 總之，我們通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，蛇孢假殼素O能夠激活MAPK通路，降低GSK-3β的非磷酸化表達(dá)，抑制反應(yīng)性基因cyclinD1的轉(zhuǎn)錄，抑制Bcl-