骨折愈合過(guò)程中DGKα、PKC在大鼠腦干和小腦的表達(dá)研究.pdf

1、骨折發(fā)生后，局部注射神經(jīng)生長(zhǎng)因子可以促進(jìn)骨折的愈合。甘油二酯激酶(DGK)是細(xì)胞內(nèi)重要的第二信使，參與了多種細(xì)胞的生理和病理過(guò)程。本研究通過(guò)建立大鼠骨折模型，檢測(cè)DGKα和蛋白激酶C(PKC)在不同病理階段的腦干和小腦的蛋白表達(dá)、細(xì)胞定位和分布變化，探討DGKα在大鼠骨折愈合病理過(guò)程中加速骨折愈合的機(jī)制。
　　本研究應(yīng)用SD大鼠制成骨折模型，并設(shè)置假手術(shù)的正常SD大鼠做對(duì)照，根據(jù)骨折愈合分期方法與SD大鼠骨折局部組織學(xué)變化，將大鼠

2、骨折愈合過(guò)程分為三期:早期即術(shù)后1-3d;中期即術(shù)后4-14d;后期即術(shù)后15d之后。分別于術(shù)后第3，7，14，24，42d各處死1只對(duì)照組和5只模型組大鼠。用半定量RT-PCR檢測(cè)腦干和小腦DGKα和PKC mRNA的表達(dá)變化，用免疫組織化學(xué)染色和免疫熒光雙標(biāo)法檢測(cè)骨折愈合過(guò)程中DGKα和PKC的細(xì)胞定位和蛋白的分布變化。
　　結(jié)果顯示:在早期和中期模型組大鼠腦干和小腦內(nèi)病理改變以炎性浸潤(rùn)為主，神經(jīng)元在骨折三期均未發(fā)生明顯的形態(tài)

3、學(xué)改變。模型組術(shù)后3，7，14d，腦干中DGKα和PKC mRNA的表達(dá)水平高于對(duì)照組(P＜0.05)。模型組術(shù)后3，7，14，24d，小腦中DGKα mRNA的表達(dá)高于對(duì)照組水平(P＜0.05)，PKC mRNA在模型組和對(duì)照組的表達(dá)變化無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，在各骨折天數(shù)模犁組和對(duì)照組的腦干中，纖維狀結(jié)構(gòu)均呈DGKα反應(yīng)陽(yáng)性，在對(duì)照組腦干中未見DGKα陽(yáng)性細(xì)胞出現(xiàn)，模型組術(shù)后3d的腦干內(nèi)即出現(xiàn)DG

4、Kα陽(yáng)性細(xì)胞，陽(yáng)性反應(yīng)位于細(xì)胞核周的胞漿內(nèi)，至術(shù)后7d和14d，陽(yáng)性反應(yīng)的部位移至整個(gè)胞漿內(nèi)，至模型組術(shù)后24d和42d，細(xì)胞均呈DGKα反應(yīng)陰性。免疫熒光雙標(biāo)法顯示，腦干內(nèi)的DGKα陽(yáng)性細(xì)胞為神經(jīng)元。在各骨折天數(shù)對(duì)照組和模型組的腦干中，纖維狀結(jié)構(gòu)均呈PKC反應(yīng)陽(yáng)性。對(duì)照組未見PKC陽(yáng)性細(xì)胞出現(xiàn)，在模型組，PKC陽(yáng)性細(xì)胞出現(xiàn)于術(shù)后3d和7d，陽(yáng)性反應(yīng)位于胞漿，至術(shù)后14，24，42d，細(xì)胞呈PKC反應(yīng)陰性。免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果顯示，腦干內(nèi)可

5、見DGKα、PKC雙陽(yáng)性神經(jīng)元。在對(duì)照組和模型組的小腦中，纖維狀結(jié)構(gòu)均呈DGKα陽(yáng)性反應(yīng)。DGKα陽(yáng)性梨狀神經(jīng)元僅見于模型組術(shù)后3，7，14，24d，陽(yáng)性反應(yīng)位于胞漿。在對(duì)照組和模型組術(shù)后42d，均未見DGKα陽(yáng)性梨狀神經(jīng)元出現(xiàn)。在對(duì)照組和模型組的小腦中，僅纖維狀結(jié)構(gòu)呈PKC反應(yīng)陽(yáng)性，未見PKC陽(yáng)性梨狀神經(jīng)元出現(xiàn)。
　　綜上所述:骨折愈合過(guò)程中，腦干和小腦中DGKα和PKC有著不同的表達(dá)和分布。DGKα mRNA在骨折早期和中期的