PBR在PCPA致失眠大鼠腦干中的表達(dá).pdf

1、目的:本研究擬采用腹腔注射對(duì)氯苯丙氨酸(PCPA.)制作失眠大鼠模型,同步設(shè)立生理鹽水對(duì)照組和地西泮干預(yù)組,通過(guò)行為學(xué)、體重的觀察及檢測(cè)大鼠腦干組織中PBR mRNA和蛋白的表達(dá)變化,初步探討其與失眠的關(guān)系。
　　 方法:
　　 1.動(dòng)物分組及處理:采用36只清潔級(jí)健康雄性SD大鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,鼠齡8～10周,體重180～220g。隨機(jī)分為模型組、對(duì)照組和干預(yù)組,每組12只。①模型組:每日上午8:30～9:00腹腔注射PC

2、PA(300mg/kg)制作失眠大鼠模型,連續(xù)2天。其中:PCPA用生理鹽水(pH:7～8)溶解,按1ml/100g配制成混懸液。第三天以蒸餾水按0.1ml/Kg灌胃,連續(xù)5天;②對(duì)照組:每日上午8:30～9:00以生理鹽水按0.1ml/Kg進(jìn)行腹腔注射,連續(xù)2天,第三天以蒸餾水按0.1ml/Kg灌胃,連續(xù)5天;③干預(yù)組:同模型組腹腔注射PCPA建立失眠模型之后,第三天用地西泮(0.92mg/kg)水溶液灌胃,每日上午8:30～9:00

3、一次,連續(xù)5天。其中地西泮片用蒸餾水溶解,按1ml/100g配制成水溶液。
　　 2.動(dòng)物行為學(xué)觀察及體重監(jiān)測(cè):每日定時(shí)觀察大鼠行為學(xué)表現(xiàn),每3小時(shí)錄制大鼠活動(dòng)視頻半小時(shí),通過(guò)自身及組間比較大鼠行為學(xué)改變。分別于入組時(shí)、第一次腹腔注射PCPA前、第一次灌胃前及處死大鼠取材前當(dāng)天上午8:00～8:20測(cè)量所有大鼠體重并記錄。
　　 3.將各組受試動(dòng)物于開(kāi)始灌胃治療后第6天快速斷頭處死,取大鼠腦干組織,超低溫保存。
　

4、　 4.用RT-PCR法和Western-Blot法分別檢測(cè)大鼠腦干PBRmRNA和蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1.大鼠行為學(xué)變化:對(duì)照組大鼠無(wú)明顯變化。模型組和干預(yù)組大鼠于第一次腹腔注射PCPA混懸液28～30h后,晝伏夜出的節(jié)律消失、睡眠時(shí)間縮短等失眠表現(xiàn),模型成功率94.4％。干預(yù)組大鼠于地西泮灌胃后失眠癥狀較模型組逐漸恢復(fù)。
　　 2.體重改變:入組時(shí)、第一次腹腔注射PCPA前三組大鼠體重相當(dāng);第

5、一次灌胃前模型組和干預(yù)組體重相當(dāng),但較對(duì)照組均減輕;處死大鼠取材前模型組與干預(yù)組較對(duì)照組均減輕,干預(yù)組較模型組增加。
　　 3.與對(duì)照組和干預(yù)組相比,模型組大鼠腦干PBRmRNA表達(dá)上調(diào);干預(yù)組和對(duì)照組PBR mRNA表達(dá)無(wú)差異。
　　 4.與對(duì)照組和干預(yù)組相比,模型組大鼠腦干PBR蛋白表達(dá)上調(diào);干預(yù)組和對(duì)照組PBR蛋白表達(dá)無(wú)差異。
　　 結(jié)論:
　　 1.腹腔注射PCPA可以成功復(fù)制大鼠失眠模型,該法操