耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的基因分型研究.pdf

1、目的：
　　 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（methicillin-resistantStaphylococcusaureus，MRSA）是臨床常見(jiàn)的重要病原菌，具有多重耐藥性，給臨床治療帶來(lái)極大困難，而且在世界范圍內(nèi)廣泛蔓延，常引起感染的暴發(fā)和流行，給社會(huì)帶來(lái)嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失和不良影響。
　　 了解本地區(qū)MRSA菌株的分子流行病學(xué)特點(diǎn)，明確本地區(qū)MRSA的基因型別及其分布規(guī)律，評(píng)估流行變化趨勢(shì)，探討MRSA菌株進(jìn)化及遺傳特性，

2、為本地區(qū)MRSA的防治提供依據(jù)。
　　 方法：
　　 1、菌株選?。菏占?007年1月-2008年8月間遼寧省五家教學(xué)醫(yī)院（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬一院，中國(guó)醫(yī)科大學(xué)盛京醫(yī)院，遼寧省人民醫(yī)院，大連市中心醫(yī)院，大連醫(yī)科大學(xué)附屬一院）門(mén)診及住院患者非痰標(biāo)本分離的MRSA菌株104株。
　　 2、SCCmec基因分型：用PCR方法擴(kuò)增mec復(fù)合物及ccr復(fù)合物各基因組分，產(chǎn)物經(jīng)電泳成像后初步判斷其片段大小，并將產(chǎn)物送上海生工生

3、物技術(shù)有限公司純化并進(jìn)行雙向測(cè)序后進(jìn)行BLAST對(duì)比分析，明確SCCmec基因型。
　　 3、殺白細(xì)胞毒素（PVL）：PCR方法擴(kuò)增特征基因，經(jīng)測(cè)序后上網(wǎng)比對(duì)確證。
　　 4、多位點(diǎn)序列分型（MLST）：以7個(gè)管家基因的PCR片段序列分析為基礎(chǔ)，產(chǎn)物經(jīng)純化后進(jìn)行雙向測(cè)序，直接將結(jié)果提交數(shù)據(jù)庫(kù)（http.//www.mlst.net）進(jìn)行比較，比較每個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)的等位基因，獲得序列號(hào)（ST），與已知的MRSA流行株進(jìn)行比較

4、和分析。
　　 5、葡萄球菌A蛋白基因多態(tài)性分析（spa）：PCR方法擴(kuò)增葡萄球菌的表面蛋白X區(qū)，測(cè)序結(jié)果與數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//www.ridom.de/spaserver/）中公布的堿基重復(fù)序列進(jìn)行比較，根據(jù)排列方式及次數(shù)確定MRSA的型別。
　　 結(jié)果：
　　 1、SCCmec基因分型：遼寧地區(qū)分離的MRSA以SCCmecⅡ、Ⅲ型為主，分別占本次分離的50％和45.2％，其中，中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬一院MRSA感

5、染以SCCmecⅢ型為主，占該院院分離株的61.8％，其他四家教學(xué)醫(yī)院則以Ⅱ型占優(yōu)勢(shì)，大連醫(yī)科大學(xué)附屬一院MRSA菌株SCCmecⅡ型為100％。同時(shí)，在沈陽(yáng)地區(qū)發(fā)現(xiàn)5株社區(qū)MRSA（SCCmecⅣMRSA3株，分離于中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬一院；SCCmecⅤ型菌株2株，中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬一院和盛京醫(yī)院各1株）。
　　 2、PVL毒素：只有3株SCCmecⅣ型社區(qū)MRSA菌株P(guān)VL毒素為陽(yáng)性，其余101株MRSA均為陰性。
　　

6、 3、MLST分型：挑選25株MRSA進(jìn)行MLST分型（SCCmecⅡ型7株，SCCmecⅢ型13株及5株CA-MRSA），結(jié)果HA-MRSA以ST239為主，其次為ST5，CA-MRSA主要為ST59型，其次為ST7，有1株CA-MRSA未能成功進(jìn)行基因分型。
　　 4、spa分型：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬一院以t030為主，占該院分離率的56.4％，盛京醫(yī)院以t570、t030為主，分別占該院分離率的33.3％，大連醫(yī)科大學(xué)附屬一院

7、t002占該院分離率的86.7％，大連市中心醫(yī)院t002占該院分離率的66.7％，遼寧省人民醫(yī)院t002占該院分離株的60％。
　　 結(jié)論：
　　 1、遼寧地區(qū)分離MRSA以SCCmecⅢ-t030和SCCmecⅡ-t002為主，并且呈交替流行的趨勢(shì)；
　　 2、CA-MRSA菌株的出現(xiàn)，提示遼寧地區(qū)MRSA菌株有由醫(yī)院向社區(qū)播散趨勢(shì)；
　　 3、CA-MRSA比HA-MRSA更容易攜帶PVL毒素，提示其