原發(fā)性肝癌GPC3的表達與術(shù)后早期復(fù)發(fā)關(guān)系的研究.pdf

1、1. 目的：明確與原發(fā)性肝細胞癌（肝癌）根治性切除術(shù)后早期復(fù)發(fā)密切相關(guān)的臨床病理危險因素，探討GPC3（磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3)表達與肝癌術(shù)后高危復(fù)發(fā)的關(guān)系。
　　 2. 方法：回顧性分析廣東省人民醫(yī)院肝膽外科自2003年1 月至2007年1 月收治住院、并接受根治手術(shù)、術(shù)后病理證實為原發(fā)性肝細胞癌患者的臨床病理資料，隨訪日期截止2009年1 月，隨訪終點為腫瘤復(fù)發(fā)。根據(jù)腫瘤復(fù)發(fā)時間將患者分為早期復(fù)發(fā)組及非早期復(fù)發(fā)組。早期復(fù)發(fā)指

2、腫瘤肝內(nèi)復(fù)發(fā)時間在術(shù)后一年以內(nèi)；非早期復(fù)發(fā)指術(shù)后隨訪2年內(nèi)未見腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。共有57例患者入選本研究，其中早期復(fù)發(fā)組29例，非早期復(fù)發(fā)組28例；分析比較兩組患者的各項臨床病理資料，包括11 項一般臨床因素（性別、年齡、HbsAg、HbeAg、HCV、HBVDNA、Child分級、AFP、ALT、肝硬化，圍手術(shù)期輸血）及8 項腫瘤因素（腫瘤直徑、腫瘤數(shù)目、衛(wèi)星結(jié)節(jié)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、微血管侵犯、門靜脈侵犯、包膜侵犯、Edmonson分級）；通

3、過單因素分析，明確與肝癌早期復(fù)發(fā)相關(guān)的臨床病理危險因素。
　　 我們前期研究工作利用Affymetrix U133 plus 2.0 芯片在全基因組范圍內(nèi)比較了10例術(shù)后1年內(nèi)復(fù)發(fā)及10例術(shù)后超過2年未復(fù)發(fā)的兩組肝癌患者基因表達譜的差異，發(fā)現(xiàn)GPC3基因在早期復(fù)發(fā)組中表達明顯上調(diào)，接近4 倍,這提示其表達上調(diào)可導(dǎo)致肝癌細胞的侵襲性顯著增強、與肝癌早期復(fù)發(fā)密切相關(guān)。本研究采用實時熒光定量RT-PCR 法（real time RT-

4、PCR）和免疫組化法，分別在mRNA和蛋白質(zhì)水平驗證GPC3 在早期復(fù)發(fā)組和非早期復(fù)發(fā)組患者肝癌組織中的差異表達。
　　 將GPC3陽性表達作為候選危險因素，與單因素分析顯示的與肝癌早期復(fù)發(fā)相關(guān)的臨床病理危險因素一起，進入logistic 多元回歸分析，明確與肝癌早期復(fù)發(fā)密切相關(guān)的獨立危險因素。采用SPSS13.0 統(tǒng)計分析軟件進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料采用卡方檢驗，計量資料采用兩個獨立樣本t檢驗，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義

5、。
　　 3. 結(jié)果：
　　 3.1. 早期復(fù)發(fā)相關(guān)臨床病理危險因素的單因素分析
　　 單因素分析顯示早期復(fù)發(fā)組與非早期復(fù)發(fā)組比較有四項指標差異有顯著性，分別是：合并肝硬化（P=0.022）、腫瘤直徑大于5cm（P=0.000）、存在腫瘤微血管侵犯（P=0.022）和術(shù)前ALT 水平升高超過兩倍（P=0.003），這些指標可能與肝癌術(shù)后早期復(fù)發(fā)密切相關(guān)。
　　 3.2. 實時熒光定量 RT-PCR 法檢測

6、GPC3 在肝癌細胞中的表達
　　 實時熒光定量 RT-PCR 法示早期復(fù)發(fā)組中GPC3 相對表達量為(3.977±0.676)，非早期復(fù)發(fā)組為(3.503±0.926)，早期復(fù)發(fā)組中GPC3的相對表達量高于非早期復(fù)發(fā)組，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=2.213，P=0.031）。
　　 3.3. 免疫組化法檢測GPC3 在肝癌細胞中的表達
　　 在正常肝組織中GPC3 呈陰性表達；57例肝癌標本中，GPC3 表達總陽

7、性率為68.42%（39/57）。在早期復(fù)發(fā)組中，GPC3陽性表達率為82.76%（24/29），而非早期復(fù)發(fā)組中GPC3陽性表達率只有53.57%（15/28），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（? 2=5.617，P＜0.05）。GPC3 蛋白表達與肝癌的一般臨床因素和腫瘤因素?zé)o關(guān)(P>0.05)。
　　 3.4. 肝癌根治性切除術(shù)后早期復(fù)發(fā)密切相關(guān)的獨立危險因素
　　 合并肝硬化、腫瘤直徑大于5cm、存在腫瘤微血管侵犯、術(shù)前AL

8、T 水平升高超過兩倍，和GPC3陽性表達這五項候選危險因素一起進入logistic 多元回歸分析，結(jié)果顯示僅GPC3陽性表達、合并肝硬化以及存在腫瘤微血管侵犯是與肝癌根治性切除術(shù)后早期復(fù)發(fā)密切相關(guān)的獨立危險因素。GPC3陽性表達的回歸系數(shù)為1.961（P=0.034 ）， OR 值為7.110（95%CI:1.158~43.639）；腫瘤直徑大于5cm的回歸系數(shù)為為2.100（P=0.011），OR 值為8.170（95%CI:1.62