EGCG對人食管癌ECA109細(xì)胞增殖凋亡及Survivin和VEGF mRNA表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的:研究不同濃度的表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallaocatechin-3-gallate，EGCG)對體外培養(yǎng)的食管癌ECA109細(xì)胞增殖、凋亡及Survivin、VEGF mRNA表達(dá)的影響，初步探討EGCG對食管癌ECA109細(xì)胞的抑制作用及其機(jī)制。
　　方法:1.采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測不同濃度(40、80、120μg/ml)的EGCG分別作用于食管癌ECA109細(xì)胞24h，48h，72h后，用酶標(biāo)儀檢

2、測各組細(xì)胞的OD值，計算各濃度EGCG在不同時間對食管癌ECA109細(xì)胞的增殖抑制率;2.不同濃度（40、80、120μg/ml）的EGCG作用于食管癌ECA109細(xì)胞48h后，采用AnnexinⅤ-FITC和PI雙染，通過流式細(xì)胞儀（Flow Cytometry，F(xiàn)CM）檢測各組細(xì)胞的凋亡率;3.不同濃度（40、80、120μg/ml）的EGCG作用于食管癌ECA109細(xì)胞48h后，采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測細(xì)胞

3、Survivin和VEGF mRNA的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:1.倒置相差顯微鏡下觀察可見，隨著EGCG干預(yù)的濃度增加，食管癌ECA109細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞體積減小，固縮變圓，細(xì)胞染色質(zhì)凝集，細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)空泡等一系列細(xì)胞形態(tài)改變;2.不同濃度EGCG（40μg/ml、80μg/ml、120μg/ml）作用食管癌ECA109細(xì)胞24h后，細(xì)胞的增殖抑制率相對于對照組分別為14.24±0.72，21.60±1.03，29.56±1.27，各組間

4、差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);當(dāng)作用細(xì)胞48h后，細(xì)胞增殖抑制率分別為39.17±1.50，43.44±1.66，48.58±1.73，各組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);而當(dāng)作用時間達(dá)到72h后，細(xì)胞增殖抑制率則分別為49.26±0.85，54.52±2.29，58.48±1.55，各組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。對同一濃度EGCG在不同作用時間干預(yù)食管癌ECA109細(xì)胞的增殖抑制率做統(tǒng)計學(xué)分析，結(jié)果顯示EGCG

5、對食管癌ECA109細(xì)胞的增殖抑制作用在各組間均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);3.流式細(xì)胞儀檢測不同濃度EGCG（0μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、120μg/ml）作用下，食管癌ECA109細(xì)胞早期凋亡率、總凋亡率分別為0.0667±.03055、0.5200±.09539;4.8367±0.73146、10.3200±0.95252;12.2533±1.22696、24.1267±1.44057;23.5100±1.7

6、6847、34.0967±1.82878，實驗組早期、總凋亡率均明顯高于對照組，且隨EGCG濃度的增加，早期凋亡和總凋亡細(xì)胞的比例都逐漸增加。實驗組與對照組相比，且實驗組兩兩之間比較P＜0.05;4.RT-PCR檢測，在不同濃度EGCG（0μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、120μg/ml）作用下，食管癌ECA109細(xì)胞Survivin mRNA的表達(dá)量分別為0.5419±0.01873、0.4844±0.01478、0.33

7、30±0.00685、0.2155±0.00304，以對照組Survivin mRNA的表達(dá)水平最高，并隨EGCG濃度的增高，食管癌ECA109細(xì)胞Survivin mRNA表達(dá)量逐漸降低。食管癌ECA109細(xì)胞VEGF mRNA的表達(dá)量分別為1.0747±0.03547、0.9312±0.03899、0.5215±0.02270、0.3846±0.01732，以對照組VEGF mRNA的表達(dá)量最高，并隨EGCG濃度的增高，食管癌ECA

8、109細(xì)胞VEGF mRNA表達(dá)量逐漸降低，經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)分析，各組之間差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);5.Survivin與VEGF mRNA表達(dá)正相關(guān)，r=0.965，P＜0.05。
　　結(jié)論:1.EGCG可抑制食管癌ECA109細(xì)胞增殖，呈時間-濃度依賴性關(guān)系;2.EGCG對食管癌ECA109細(xì)胞的凋亡具有促進(jìn)作用，并且促凋亡作用呈劑量依賴性關(guān)系;3.EGCG能下調(diào)食管癌ECA109細(xì)胞中Survivin和VEGF mRN