姜黃素對(duì)食管癌細(xì)胞EcA-109增殖及Wnt信號(hào)通路影響的研究.pdf

1、目的:研究中藥姜黃素體外對(duì)食管癌細(xì)胞Eca-109增殖、細(xì)胞周期、凋亡以及對(duì)Wnt信號(hào)通路相關(guān)基因表達(dá)的影響，為姜黃素的進(jìn)一步開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法:
　　1采用MTS法分析不同濃度（10、20、40μmol/L）姜黃素干預(yù)不同時(shí)間后，對(duì)Eca-109細(xì)胞增殖的抑制作用。
　　2應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)經(jīng)不同濃度（10、20、40μmol/L）姜黃素作用24h、48h、72h后，Eca-109細(xì)胞的周期分布和凋亡率。應(yīng)

2、用Q-PCR和western-blot方法檢測(cè)周期蛋白CyclinB1基因和蛋白的表達(dá)水平。
　　3用Q-PCR法和western-blot方法檢測(cè)經(jīng)不同濃度(10、20、40μmol/L)姜黃素作用48h后，Eca-109細(xì)胞Wnt信號(hào)通路中β-catenin、關(guān)鍵酶GSK-3β、下游因子c-myc mRNA和蛋白表達(dá)的變化。
　　結(jié)果:
　　1 MTS試驗(yàn)結(jié)果顯示，經(jīng)不同濃度(10、20、40μmol/L)姜黃素干

3、預(yù)24、48、72h后，對(duì)Eca-109細(xì)胞增殖抑制率呈上升趨勢(shì)。姜黃素濃度越大，對(duì)細(xì)胞增殖抑制作用越明顯，并呈時(shí)間、劑量依賴性(P＜0.05)。
　　2流式細(xì)胞術(shù)測(cè)細(xì)胞結(jié)果顯示，經(jīng)不同濃度(10、20、40μmol/L)姜黃素干預(yù)48小時(shí)后，Eca-109細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡率發(fā)生明顯變化，G0/G1期細(xì)胞比例明顯下降（P＜0.01），G2、/M期細(xì)胞比例明顯增高(P＜0.01);細(xì)胞凋亡率明顯增加(P＜0.01)，姜黃素濃度越高

4、，差異越明顯。
　　Q-PCR和Western-blot檢測(cè)結(jié)果顯示，經(jīng)姜黃素處理后，CyclinB1mRNA和蛋白表達(dá)水平降低（P＜0.05）。
　　3 Q-PCR和western-blot檢測(cè)結(jié)果顯示，姜黃素干預(yù)后，與對(duì)照組細(xì)胞相比，Eca-109細(xì)胞β-catenin、c-myc mRNA和蛋白表達(dá)水平降低，有顯著性差異(P＜0.01)，GSK-3βmRNA和蛋白表達(dá)水平明顯上調(diào)，有顯著性差異(P＜0.01)。