姜黃素對食管癌細胞EcA-109增殖及Wnt信號通路影響的研究.pdf

1、目的:研究中藥姜黃素體外對食管癌細胞Eca-109增殖、細胞周期、凋亡以及對Wnt信號通路相關基因表達的影響，為姜黃素的進一步開發(fā)提供科學依據(jù)。
　　方法:
　　1采用MTS法分析不同濃度（10、20、40μmol/L）姜黃素干預不同時間后，對Eca-109細胞增殖的抑制作用。
　　2應用流式細胞術檢測經(jīng)不同濃度（10、20、40μmol/L）姜黃素作用24h、48h、72h后，Eca-109細胞的周期分布和凋亡率。應

2、用Q-PCR和western-blot方法檢測周期蛋白CyclinB1基因和蛋白的表達水平。
　　3用Q-PCR法和western-blot方法檢測經(jīng)不同濃度(10、20、40μmol/L)姜黃素作用48h后，Eca-109細胞Wnt信號通路中β-catenin、關鍵酶GSK-3β、下游因子c-myc mRNA和蛋白表達的變化。
　　結果:
　　1 MTS試驗結果顯示，經(jīng)不同濃度(10、20、40μmol/L)姜黃素干

3、預24、48、72h后，對Eca-109細胞增殖抑制率呈上升趨勢。姜黃素濃度越大，對細胞增殖抑制作用越明顯，并呈時間、劑量依賴性(P＜0.05)。
　　2流式細胞術測細胞結果顯示，經(jīng)不同濃度(10、20、40μmol/L)姜黃素干預48小時后，Eca-109細胞周期和細胞凋亡率發(fā)生明顯變化，G0/G1期細胞比例明顯下降（P＜0.01），G2、/M期細胞比例明顯增高(P＜0.01);細胞凋亡率明顯增加(P＜0.01)，姜黃素濃度越高

4、，差異越明顯。
　　Q-PCR和Western-blot檢測結果顯示，經(jīng)姜黃素處理后，CyclinB1mRNA和蛋白表達水平降低（P＜0.05）。
　　3 Q-PCR和western-blot檢測結果顯示，姜黃素干預后，與對照組細胞相比，Eca-109細胞β-catenin、c-myc mRNA和蛋白表達水平降低，有顯著性差異(P＜0.01)，GSK-3βmRNA和蛋白表達水平明顯上調，有顯著性差異(P＜0.01)。