18F-FDG評(píng)價(jià)食管癌Eca109細(xì)胞放化療療效的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分、18F-FDG評(píng)價(jià)5-FU對(duì)食管癌Eca109細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用的體外實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的：建立18F-FDG與食管癌Eca109細(xì)胞結(jié)合實(shí)驗(yàn)的方法學(xué)；探索18F-FDG細(xì)胞結(jié)合實(shí)驗(yàn)早期評(píng)價(jià)5-FU對(duì)食管癌Eca109細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用的可行性。
　　 方法：以人食管鱗癌Eca109細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，依據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果依次更改實(shí)驗(yàn)條件：(1)細(xì)胞濃度，(2)反應(yīng)時(shí)間，(3)18F-FDG放射性活度，(4)葡萄糖濃度，進(jìn)行

2、18F-FDG細(xì)胞結(jié)合率測(cè)定；通過(guò)18F-FDG細(xì)胞結(jié)合試驗(yàn)及細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑CCK-8測(cè)定5-FU對(duì)Eca109細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用；應(yīng)用透射電子顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化；同時(shí)應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)5-FU對(duì)Eca109細(xì)胞凋亡及周期的影響。
　　 結(jié)果：(1)18F-FDG與食管癌Eca109細(xì)胞結(jié)合實(shí)驗(yàn)基本條件：細(xì)胞數(shù)量為1×106/瓶，18F-FDG放射性活度3.7KBq，反應(yīng)時(shí)間100min，葡萄糖濃度0mol

3、/L，細(xì)胞結(jié)合率為(40.63±0.76)％。(2)加入濃度125、250、500和1000μg/ml5-FUlmL作用24h后，18F-FDG細(xì)胞結(jié)合抑制率分別為(32.2±3.3)%、(43.15±2.33)%、(51.61±1.88)%、(71.97±2.09)%，各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。細(xì)胞結(jié)合抑制率隨藥物劑量增加而增加，兩者呈正相關(guān)(r=0.97，P<0.01)。相同濃度5-FU作用24h后，CCK-8抑制率與

4、細(xì)胞結(jié)合抑制率呈正相關(guān)(r=0.844，P<0.01)。以上濃度藥物作用48h后，18F-FDG細(xì)胞結(jié)合抑制率分別為(68.14±0.85)%、(76.18±0.92)%、(79.36±0.83)%、(88.97±0.25)%，各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。細(xì)胞結(jié)合抑制率隨藥物劑量增加而增加，兩者呈正相關(guān)(r=0.969，P<0.01)。相同濃度5-FU作用48h后，CCK-8抑制率與細(xì)胞結(jié)合抑制率呈正相關(guān)(r=0.831，P

5、<0.01)。(3)透射電子顯微鏡可見(jiàn)典型細(xì)胞凋亡及壞死形態(tài)學(xué)變化。(4)流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)0、125、500、1000μg/mL5-FU作用Eca109細(xì)胞48h后，其凋亡率（早期凋亡和晚期凋亡之和）分別為(2.2±0.32)%、(8.6±0.39)%、(14.6±1.61)%、(29.7±2.27)%，各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。500、1000μg/mL5-FU作用48h后可檢測(cè)到G0/G1前期的亞二倍體峰為“凋亡峰

6、”。隨著5-FU濃度增高，G0/G1期的細(xì)胞比例升高，G2/M期、S期細(xì)胞比例則明顯降低(P<0.05)。
　　 結(jié)論：5-FU對(duì)食管癌Eca109細(xì)胞體外生長(zhǎng)有抑制作用；18F-FDG細(xì)胞結(jié)合抑制率、CCK-8細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率、流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，都可用于評(píng)價(jià)5-FU作用24h、48h后對(duì)食管癌Eca109細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用。
　　 第二部分18F-FDG評(píng)價(jià)放療對(duì)食管癌Eca109細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用的體外實(shí)驗(yàn)研究

7、
　　 目的：探索18F-FDG細(xì)胞結(jié)合實(shí)驗(yàn)早期評(píng)價(jià)放療對(duì)食管癌Eca109細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用的可行性。
　　 方法：以人食管癌Eca109細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，通過(guò)18F-FDG細(xì)胞結(jié)合實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑CCK-8測(cè)定不同放射劑量(分別為2、4、6、8Gy)對(duì)Eca109細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用；應(yīng)用透射電子顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化；同時(shí)應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)放療對(duì)Eca109細(xì)胞凋亡及周期的影響。
　　 結(jié)果

8、：(1)不同放射劑量(分別為2、4、6、8Gy)作用Eca109細(xì)胞24h后，18F-FDG細(xì)胞結(jié)合抑制率分別為(-6.16±2.92)%、(8.33±3.88)%、(15.73±2.71)%、(22.6±3.46)%，各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。細(xì)胞結(jié)合抑制率隨放射劑量增加而增加，兩者呈正相關(guān)(r=0.786，P<0.01)。以上放射劑量作用48h后，細(xì)胞結(jié)合抑制率分別為(31.04±3.29)%、(45.13±3.12)

9、%、(51.47±1.36)%、(57.24±2.68)%，各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。細(xì)胞結(jié)合抑制率隨放射劑量增加而增加，兩者呈正相關(guān)(r=0.964，P<0.01)。相同放射劑量作用48h后，CCK-8抑制率與細(xì)胞結(jié)合抑制率呈正相關(guān)(r=0.736，P<0.01)。(2)透射電子顯微鏡可見(jiàn)典型細(xì)胞凋亡及壞死形態(tài)學(xué)變化。(4)流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)0Gy，2Gy,4Gy，8Gy組放射線作用Eca109細(xì)胞48h后，其凋亡率（

10、早期凋亡和晚期凋亡之和）分別為(2.5±0.39)%、(9.5±1.56)%、(16.8±2.39)%、(22.3±1.87)%。各組凋亡率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。8Gy組作用48h后可檢測(cè)到G0/G1前期的亞二倍體峰為“凋亡峰”。隨著放射劑量增加，G0/G1期和S期細(xì)胞比例降低，G2/M期比例則明顯升高(P<0.05)。
　　 結(jié)論：放療對(duì)食管癌Eca109細(xì)胞體外生長(zhǎng)有抑制作用；18F-FDG細(xì)胞結(jié)合抑制率、