糖尿病大鼠勃起功能障礙氧化損傷機制研究.pdf

1、目的：
　　通過大鼠糖尿病性勃起功能障礙模型研究氧化應激損傷與勃起功能障礙的關(guān)系及分子機制。進一步完善鏈脲佐菌素誘導糖尿病性大鼠ED模型及成模大鼠陰莖海綿體組織中谷胱甘肽(glutathione，GSH)、谷胱甘肽過氧化氫酶(GlutathionePeroxidase，GSH-Px)、凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bc1-2的表達檢測，觀察大鼠陰莖海綿體神經(jīng)組織、平滑肌顯微結(jié)構(gòu)及超微結(jié)構(gòu)改變。
　　方法：
　　一、實驗動物

2、的分組及造模：選取10周齡SPF級雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠60只，體重(247±26g)，隨機分為：正常對照組(20只)、檸檬酸一檸檬酸鈉緩沖液對照組(20只)、糖尿病組(20只)。糖尿病組大鼠采用尾靜脈注射鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)60mg/kg的方法建立大鼠糖尿病模型，96小時后隨機血糖大于16.7mmol/L確定為糖尿病造模成功。8周后采用頸部皮下注射阿撲嗎啡(Apomorphine，A

3、PO)100ug/kg，觀察30min內(nèi)勃起潛伏期即從給藥開始到出現(xiàn)陰莖勃起的時間、陰莖勃起次數(shù)及陰莖勃起陽性率，檢測陰莖勃起功能。
　　二、實驗標本的采集及實驗室檢測。
　　1、光鏡及電鏡下觀察上述各組陰莖海綿體及血管內(nèi)皮組織形態(tài)學改變。
　　2、應用比色法及免疫組化法定量或定性檢測各組陰莖海綿體組織中GSH、GSH-Px、Bax及Bc1-2的表達。
　　三、統(tǒng)計分析
　　各實驗組間的數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差表

4、示，t檢驗，單因素方差分析進行多組及組間統(tǒng)計學處理，P值小于0.05為差異統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果：
　　1、糖尿病勃起功能障礙大鼠模型建立及誘導實驗
　　20只注射STZ的大鼠中19只成模，成模率95％。飼養(yǎng)8周后各成模組大鼠均出現(xiàn)多飲、多食、多尿及體重減輕等糖尿病癥狀。成模大鼠因感染、酮癥酸中毒而死亡4只，病死率為21％。正常對照組及緩沖液對照組的陰莖勃起次數(shù)及勃起陽性率與DM組相比具有顯著性差異(P<0.01)。<

5、br>　　2、GSH、GSH-Px、Bax及Bc1-2的表達。
　　注射STZ8周后，按APO誘導實驗未出現(xiàn)勃起者作為糖尿病ED標準，糖尿病組成糖尿病性ED模型為14只，糖尿病非勃起功能障礙1只剔除出組。糖尿病ED組大鼠與正常對照組及緩沖液對照組相比，陰莖海綿體組織中GSH含量明顯降低，GSH-Px活性明顯降低。免疫組化染色顯示，Bax、Bc1-2蛋白主要表達于陰莖海綿體血管內(nèi)皮細胞的胞漿中，多以棕色、深棕色著色為主。正常對照組及

6、緩沖液組Bc1-2細胞陽性率高、Bax細胞陽性率低，Bc1-2/Bax比值較高；而糖尿病ED組大鼠Bc1-2/Bax比值較低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　3、大鼠陰莖組織顯微及超微結(jié)構(gòu)的改變注射STZ后8周，糖尿病勃起功能障礙組大鼠陰莖組織光鏡下可見陰莖海綿體平滑肌細胞萎縮、數(shù)目減少，成纖維細胞增多，內(nèi)皮細胞纖維化；電鏡下可見血竇內(nèi)皮多處斷裂，小血管內(nèi)皮細胞增生，凸向管腔，使管腔狹窄，此外，內(nèi)皮細胞胞膜附件有許多小的髓

7、質(zhì)體結(jié)構(gòu)進一步阻塞管腔。核畸形，染色質(zhì)與核基質(zhì)分離。小血管基膜增厚且不規(guī)則，血管壁飲液泡增多，內(nèi)皮細胞連接處縫隙增寬，血管外間質(zhì)有積液。
　　結(jié)論：
　　1、本研究應用糖尿病引起的勃起功能障礙動物模型，尋找氧化應激標志物。本研究應用SD大鼠作為研究對象，通過尾靜脈注射鏈脲佐菌素的方法成功建立DM性ED模型。應用分光光度法、免疫組織化學法和透射式電子顯微鏡等手段分別研究勃起組織的抗氧化物質(zhì)、組織結(jié)構(gòu)和細胞超微結(jié)構(gòu)的變化。我們的

8、研究表明，大鼠陰莖組織中GSH、GSH-Px含量減少，活性降低，陰莖血管內(nèi)皮及海綿體組織處于過氧化狀態(tài)造成氧化應激損傷。Bc1-2及Bax共同調(diào)節(jié)陰莖海綿體細胞凋亡，糖尿病ED大鼠陰莖海綿體組織中二者比例下調(diào)，細胞凋亡增加。
　　2、糖尿病性ED大鼠陰莖海綿體內(nèi)皮層明顯纖維化、血竇管腔狹窄阻塞、線粒體和內(nèi)皮功能損傷及細胞質(zhì)膜微囊增多等現(xiàn)象明顯。本研究表明，DM性勃起功能障礙中存在顯著地氧化應激損傷。推測通過長期應用有效地抗氧化劑增