糖基化終產(chǎn)物對(duì)人腎小球系膜細(xì)胞纖維化相關(guān)因子表達(dá)的影響.pdf

1、目的：探討體外培養(yǎng)條件下糖基化終產(chǎn)物(AGEs)對(duì)人腎小球系膜細(xì)胞(HRMC)增殖以及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)、結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)及纖維連接蛋白(FN)表達(dá)的影響及其可能的作用機(jī)制。
　　 方法：采用體外人腎小球系膜細(xì)胞系的培養(yǎng)方法，同時(shí)并制備糖化牛血清白蛋白(AGE-BSA)，分別用不同濃度的AGE-BSA作用相同時(shí)間和同一濃度的AGE-BSA干預(yù)不同時(shí)間。四唑鹽比色試驗(yàn)(MTT)法測(cè)定細(xì)胞的生長(zhǎng)情況；蛋白

2、質(zhì)免疫印跡(Western blotting)方法檢測(cè)細(xì)胞中RAGE的蛋白表達(dá)；半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法測(cè)定細(xì)胞TGF-β1、CTGF和FN的mRNA水平；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法測(cè)定細(xì)胞上清液中的TGF-β1蛋白含量。
　　 結(jié)果：(1)不同濃度的AGE-BSA干預(yù)系膜細(xì)胞48h和200mg/L濃度的AGE-BSA干預(yù)系膜細(xì)胞不同時(shí)間后，系膜細(xì)胞均明顯增殖，AGE-BSA各干預(yù)組與空白對(duì)照組、相同

3、濃度的BSA組或相同時(shí)間點(diǎn)的BSA組比較有顯著性差異(P＜0.05)。(2)在人腎小球系膜細(xì)胞中存在少量RAGE的表達(dá)，AGE-BSA能夠誘導(dǎo)系膜細(xì)胞中RAGE的表達(dá)增加；在加入不同濃度的AGE-BSA48h后以及加入200m妙L的AGE-BSA作用不同時(shí)間后，TGF-β1、CTGF和FN較空白對(duì)照組和相應(yīng)濃度或時(shí)間的BSA組均明顯升高(P＜0.05)。(3)AGE-BSA+抗RAGE抗體明顯抑制AGE-BSA誘導(dǎo)TGF-β1、CTGF