不同保存方式對(duì)嗅鞘細(xì)胞活性的影響.pdf

1、目的：
　　 脊髓損傷（spinal cord injury，SCI）是臨床常見多發(fā)病，其致殘率高，發(fā)病率逐年攀升，在眾多療法中，嗅鞘細(xì)胞（olfactory ensheathing cells，OECs）移植的療效最佳。臨床移植的細(xì)胞源于流產(chǎn)胎兒的嗅球，其來(lái)源少，時(shí)間、地點(diǎn)不確定，而需要臨床移植治療的SCI病人亦同樣存在時(shí)間、地點(diǎn)不固定等問題。流產(chǎn)胎兒的嗅球需要及時(shí)取材培養(yǎng)，因OECs不能無(wú)限傳代，且在培養(yǎng)過程中極易受成纖維等

2、雜細(xì)胞的污染，培養(yǎng)10-14天即需移植，因此，細(xì)胞培養(yǎng)與臨床移植間存在時(shí)間和區(qū)域差，極大限制了其臨床應(yīng)用。因OECs來(lái)源少，為有效利用資源，造福更多脊髓損傷患者，需幫助OECs安全地度過時(shí)間和區(qū)域差，因此細(xì)胞的保存非常重要。本試驗(yàn)的目的是探討OECs長(zhǎng)期保存的最佳方式及OECs保存的時(shí)限等問題，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　 材料與方法
　　 取2.0個(gè)月齡雄性健康Wistar大鼠的嗅球，進(jìn)行OECs培養(yǎng)，收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期

3、細(xì)胞，隨機(jī)分為五組，A組和D組：1號(hào)凍存液懸??；B組和E組：2號(hào)凍存液懸??；C組：3號(hào)凍存液懸浮（10％DMSO、5％DMSO-6％HES、5％DMSO分別為1、2、3號(hào)凍存液的低溫保護(hù)劑）。A組、B組、C組采用冰箱降溫液氮保存方式；D組和E組采用程控降溫儀降溫液氮保存方式。標(biāo)本保存一月、三月和半年后復(fù)蘇，鏡下觀察復(fù)蘇標(biāo)本的細(xì)胞形態(tài)，行MTT比色法、臺(tái)盼藍(lán)染色法（TBR）檢測(cè)標(biāo)本活性，各指標(biāo)均行組間組內(nèi)對(duì)比。
　　 結(jié)果：

4、>　　 鏡下見5％DMSO-6％HES組標(biāo)本復(fù)蘇細(xì)胞胞體透光度和立體感較好，皺縮細(xì)胞及裂解細(xì)胞碎片少，細(xì)胞貼壁和增殖較快；5％DMSO組易見皺縮細(xì)胞和細(xì)胞碎片，胞體透光度和立體感差的細(xì)胞數(shù)量多，細(xì)胞貼壁時(shí)間長(zhǎng)且增殖慢；而10％DMSO組居于二者之間。
　　 標(biāo)本保存一月、三月及半年后復(fù)蘇，其中：1.同種保存方式下，組內(nèi)差異不顯著（P>0.05）；2.同種低溫保護(hù)劑下，冰箱降溫液氮保存與程控降溫儀降溫液氮保存相比，差異不顯著（P

5、>0.05）；3.不同低溫保護(hù)劑下，5％DMSO-6％HES組細(xì)胞的活性比10％DMSO組好，差異顯著（P<0.05）；10％DMSO組比5％DMSO組好，差異顯著（P<0.05）。
　　 冰箱降溫液氮保存三月，復(fù)蘇細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)5天檢測(cè)，B組細(xì)胞的活性比A組和C組均好，差異顯著（P<0.05）；A組比C組好，差異顯著（P<0.05）。
　　 1、2和3號(hào)凍存液隨機(jī)分組懸浮OECs，室溫放置2小時(shí)后檢測(cè)，每組細(xì)胞的活性均有

6、下降，10％DMSO組明顯低于另兩組，差異顯著（P<0.05）；而后兩組差異不顯著（P>0.05）。
　　 標(biāo)本低溫保存半年后復(fù)蘇，細(xì)胞不再洗滌，繼續(xù)存于原凍存液內(nèi)，室溫下放置不同時(shí)間，每組細(xì)胞活性均下降，以10％DMSO組影響最大。
　　 結(jié)論：
　　 1.選取OECs凍存液時(shí)，主張使用5％DMSO-6％HES作為低溫保護(hù)劑；
　　 2.對(duì)于小樣本OECs的保存，選用冰箱降溫液氮保存方式；