嗅鞘細(xì)胞（OECs）的分離培養(yǎng)及其應(yīng)用初探.pdf

1、脊髓損傷(spinal cord injury，SCI)是臨床上常見病多發(fā)病，嚴(yán)重的脊髓損傷多發(fā)生在青壯年，并且在我國(guó)有逐年增加的趨勢(shì)。脊髓損傷的治療沒有有效的方法。目前治療的策略主要局限于預(yù)防和減少繼發(fā)損傷及有助于神經(jīng)恢復(fù)或再生的干預(yù)調(diào)節(jié)。實(shí)驗(yàn)表明胚胎脊髓移植、細(xì)胞(干細(xì)胞)移植、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植、基因治療等使脊髓功能得到了部分恢復(fù)，為脊髓損傷的治療提供了新的治療方法。尤其是嗅鞘細(xì)胞(Ofactory esheathing cell，O

2、ECs)移植修復(fù)脊髓損傷在實(shí)驗(yàn)和臨床應(yīng)用中獲得了初步成功，成為有望解決脊髓損傷這一臨床世紀(jì)難題的重要方法之一。 本實(shí)驗(yàn)主要探討了小鼠OECs的分離培養(yǎng)、純化增殖和鑒定方法，并初步研究了OECs對(duì)神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)的作用，目的是摸索出一套快速、穩(wěn)定、高效的OECs的培養(yǎng)方法，為研究OECs在治療SCI作用提供細(xì)胞來(lái)源和理論基礎(chǔ)。 實(shí)驗(yàn)分別采用4種不同的分離方法進(jìn)行OECs的分離，獲得的細(xì)胞懸液在同一條件下進(jìn)行培養(yǎng)，在第12天時(shí)對(duì)

3、細(xì)胞的數(shù)量和形態(tài)進(jìn)行比較和觀察。分別采用3種不同的純化方法對(duì)OECs進(jìn)行純化，在第12天時(shí)對(duì)細(xì)胞的純度進(jìn)行比較。將培養(yǎng)的OECs和背根神經(jīng)節(jié)(dorsal root ganglion，DRG)消化制成細(xì)胞懸液，以相同比例接種，接種密度為10<'4>/ml，10天后將聯(lián)合培養(yǎng)的細(xì)胞置于倒置顯微鏡下進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，采用機(jī)械破碎后胰酶消化再經(jīng)紗網(wǎng)過(guò)濾的分離方法分離OECs的效果明顯比其它方法好，分離得到OECs數(shù)量最多

4、，并且對(duì)細(xì)胞的形態(tài)沒有影響；分離培養(yǎng)的OECs成雙極或梭形、多突起形和扁圓形油煎蛋形，形態(tài)學(xué)特征明顯：差速貼壁和Ara-c抑制相結(jié)合的純化培養(yǎng)方法兼收了兩者的優(yōu)點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)證實(shí)是一種簡(jiǎn)單經(jīng)濟(jì)而又有實(shí)效的OECs培養(yǎng)方法；OECs對(duì)被根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)具有促進(jìn)作用，揭示OECs對(duì)SCI的恢復(fù)有促進(jìn)作用，但是還要有進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)來(lái)證明。 本實(shí)驗(yàn)摸索出了一套成熟OECs的分離培養(yǎng)純化方法，為研究OECs生物學(xué)特征以及應(yīng)用提供了穩(wěn)定的細(xì)胞來(lái)源，