宮內(nèi)缺氧對(duì)肺發(fā)育及肺組織VEGF表達(dá)變化的影響.pdf

1、第一章宮內(nèi)缺氧對(duì)新生大鼠宮內(nèi)肺發(fā)育及肺VEGF表達(dá)變化的影響
　　 目的:
　　 建立宮內(nèi)缺氧模型,觀察不同宮內(nèi)缺氧時(shí)間對(duì)新生大鼠宮內(nèi)肺發(fā)育的影響及出生時(shí)肺組織VEGF的表達(dá)變化。
　　 方法:
　　 通過(guò)降低孕鼠氧濃度吸入至10±0.5％,每天持續(xù)缺氧8小時(shí),建立宮內(nèi)缺氧模型。實(shí)驗(yàn)分為四組:空氣對(duì)照組(簡(jiǎn)稱(chēng)對(duì)照組),缺氧2天組,缺氧6天組和缺氧10天組。自然分娩后,新生大鼠稱(chēng)重后處死,對(duì)其進(jìn)行肺濕重、肺

2、濕重/體重的測(cè)定；HE染色光鏡下觀察肺組織病理改變并測(cè)定放射狀肺泡計(jì)數(shù)(RAC)、肺血管形態(tài)；電鏡下觀察肺內(nèi)細(xì)胞變化；免疫組化方法測(cè)定肺組織VEGF蛋白表達(dá)及realtime-PCR測(cè)定肺組織VEGF mRNA表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1.大鼠宮內(nèi)缺氧模型建立各缺氧組新生鼠出生體重明顯低于對(duì)照組(p均<0.05),肺組織病理示:肺泡結(jié)構(gòu)不規(guī)則,排列紊亂,肺泡間隔分布不均勻,肺泡腔見(jiàn)出血,提示大鼠宮內(nèi)缺氧模型復(fù)制成功。<

3、br>　　 2.肺組織一般情況隨宮內(nèi)缺氧天數(shù)的增加各缺氧組新生大鼠出生時(shí)肺濕重逐漸降低,與對(duì)照組相比,p均<0.05；肺濕重/體重在缺氧2天組明顯降低(p<0.05),隨宮內(nèi)缺氧天數(shù)的延長(zhǎng)反而增加。
　　 3.肺組織HE染色隨著缺氧天數(shù)增加,肺泡結(jié)構(gòu)不規(guī)則,排列紊亂,肺泡間隔分布不均勻,肺泡腔可見(jiàn)不同程度出血。
　　 4.放射狀肺泡計(jì)數(shù)缺氧2天組即明顯降低(p<0.05),隨宮內(nèi)缺氧天數(shù)的增加進(jìn)一步降低(p均<0.05

4、)。
　　 5.肺血管形態(tài)測(cè)定隨著宮內(nèi)缺氧時(shí)間的延長(zhǎng)肺小動(dòng)脈管壁厚度、管壁厚度/肺小動(dòng)脈外徑(WT％)增加,缺氧10天組增加明顯(p<0.05)。
　　 6.肺組織電鏡下改變隨著宮內(nèi)缺氧時(shí)間的延長(zhǎng),Ⅰ、Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞破壞加重,內(nèi)皮細(xì)胞增生、肺間質(zhì)增生更明顯。
　　 7.肺組織VEGF蛋白表達(dá)隨著宮內(nèi)缺氧時(shí)間的延長(zhǎng),肺VEGF蛋白表達(dá)逐漸增強(qiáng)。
　　 8.肺組織VEGF mRNA表達(dá)隨著宮內(nèi)缺氧時(shí)間的延長(zhǎng)

5、,肺VEGFmRNA表達(dá)逐漸增加。
　　 結(jié)論:
　　 1.宮內(nèi)缺氧致新生大鼠宮內(nèi)肺發(fā)育受阻及肺組織損傷。
　　 2.宮內(nèi)缺氧新生大鼠出生時(shí)肺VEGF表達(dá)增多,宮內(nèi)缺氧下,VEGF可能是參與宮內(nèi)肺發(fā)育的重要調(diào)節(jié)因子。
　　 第二章宮內(nèi)缺氧對(duì)新生大鼠生后肺發(fā)育及肺VEGF表達(dá)變化的影響
　　 目的:
　　 建立宮內(nèi)缺氧模型,觀察宮內(nèi)缺氧對(duì)生后常壓常氧生存狀態(tài)下新生大鼠肺發(fā)育的影響,及宮內(nèi)缺氧

6、生后不同生存時(shí)間新生大鼠肺組織VEGF的表達(dá)變化,為探討宮內(nèi)缺氧患兒生后治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:
　　 建立宮內(nèi)缺氧模型(同第一章)。實(shí)驗(yàn)分組為:空氣對(duì)照組(簡(jiǎn)稱(chēng)對(duì)照組),缺氧6天組(簡(jiǎn)稱(chēng)缺氧組)。兩組新生大鼠出生后均置于常壓常氧下飼養(yǎng)。分別于出生時(shí)、生后7d、14d、21d行相關(guān)檢查(同第一章),并于21d行肺功能檢測(cè)。
　　 結(jié)果:
　　 1.新生大鼠體重缺氧組生后不同生存時(shí)間點(diǎn)體重均低于同日

7、齡對(duì)照組(p均<0.05)。
　　 2.肺組織一般情況缺氧組新生大鼠生后不同生存時(shí)間點(diǎn)肺濕重均低于同日齡對(duì)照組(p均<0.05)；肺濕重/體重降低幅度減慢。
　　 3.肺組織HE染色缺氧組生后隨著日齡增長(zhǎng)出血減少,仍可見(jiàn)肺間隔增寬,肺組織正常結(jié)構(gòu)局灶性破壞,局部肺結(jié)構(gòu)紊亂,終末氣腔明顯擴(kuò)張,小肺泡數(shù)量減少。
　　 4.放射狀肺泡計(jì)數(shù)缺氧組進(jìn)行性肺泡化速度較對(duì)照組減慢(p均<0.05)。
　　 5.肺血管形

8、態(tài)測(cè)定生后各時(shí)間點(diǎn)肺血管形態(tài)缺氧組與對(duì)照組無(wú)明顯差異。
　　 6.肺組織電鏡下改變隨著日齡增長(zhǎng),缺氧組Ⅰ、Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞破壞、內(nèi)皮細(xì)胞增生較出生時(shí)減少；內(nèi)皮細(xì)胞水腫明顯,于14d達(dá)高峰；各時(shí)間點(diǎn)肺間質(zhì)較同日齡對(duì)照組增生明顯。
　　 7.肺組織VEGF蛋白表達(dá)隨著日齡增長(zhǎng),缺氧組與對(duì)照組肺組織VEGF蛋白表達(dá)均逐漸增加,缺氧組增長(zhǎng)幅度減慢,增長(zhǎng)曲線(xiàn)與對(duì)照組呈交叉現(xiàn)象。
　　 8.肺組織VEGF mRNA表達(dá)隨著日