重組人白細(xì)胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白(TNHH)對大鼠腦缺血損傷的保護作用.pdf

1、目的：腦血管疾病是目前人類疾病三大死亡原因之一，具有高致殘率和病死率的特點，嚴(yán)重危害人類的健康，其中缺血性腦血管?。╥schemia cerebral vascular diseases，ICVD）臨床較多見，約占全部腦血管病人的60%～70%，可分為全腦缺血和局灶性腦缺血兩大類，其發(fā)病機制尚不完全清楚。研究表明腦水腫和過度的炎癥反應(yīng)是腦缺血及缺血后再灌注損傷的重要原因。腦缺血后，局部大量凝血酶激活后與細(xì)胞膜上的相應(yīng)受體結(jié)合是引起腦水腫

2、的主要原因之一；大量的中性粒細(xì)胞在局部微血管內(nèi)聚集后浸潤到腦實質(zhì)，又可通過產(chǎn)生活性氧自由基、細(xì)胞因子、脂質(zhì)代謝產(chǎn)物、蛋白水解酶等，引發(fā)炎癥級聯(lián)反應(yīng)，炎癥反應(yīng)在急性腦缺血后，尤其是再灌注所引發(fā)的繼發(fā)性腦損傷中起著關(guān)鍵作用。因此，積極預(yù)防和治療腦水腫與過度炎癥反應(yīng)，可有效的降低急性缺血性腦血管病的病死率，改善預(yù)后。 重組人白細(xì)胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白（human recombinant neutrophil inhibitory

3、factor and hirulog hybrid，TNHH）是中性粒細(xì)胞抑制因子[neutrophil inhibitory factor，NIF，特征表述為NIF—Gly（5～10））]與水蛭肽（hirulog）經(jīng)基因工程重組表達(dá)和純化等技術(shù)形成的重組三功能嵌合蛋白。它不僅能抑制白細(xì)胞的黏附、活化，而且還能抑制凝血酶的激活，擬用于治療急性缺血性腦血管病。它的作用機制，一方面可能通過抑制白細(xì)胞黏附、遷移、激活和釋放的功能，治療急性缺血

4、性腦血管病的炎性損傷；另外，可能通過與凝血酶非活性區(qū)結(jié)合，抑制凝血酶引起的腦水腫。 本實驗通過制備大鼠局灶性持續(xù)性腦缺血損傷及大鼠全腦缺血再灌注損傷模型，觀察TNHH對腦缺血損傷大鼠的行為學(xué)評分、腦梗死面積、腦水腫程度、細(xì)胞因子如腫瘤壞死因子α（TNF—α）、白介素1β（IL—1β）、白介素10（IL—10）以及抗氧化指標(biāo)超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）等的影響，探討TNHH對腦缺血損傷的保護作用機制，為將TNHH開發(fā)

5、成用于治療急性缺血性腦血管疾病的新型藥物提供實驗依據(jù)。 方法： 一、局灶性持續(xù)性腦缺血損傷試驗：雄性Wistar大鼠100只，體重250～310g，隨機分為5組，即空白對照組、假手術(shù)組、腦缺血損傷模型組、TNHH組及溶媒對照組。實驗室條件適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，以大腦中動脈阻塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）法制備局灶性腦缺血損傷模型。模型制備成功缺血1小時后尾靜脈注射給藥，缺血9

6、h后同法再次給藥?？瞻讓φ战M、假手術(shù)組和模型組給予生理鹽水（NS）0.5mL/只；TNHH組給予TNHH6.75mg/kg/次；溶媒對照組給予4%甘露醇（10mM PB，pH7.0）0.5mL/只。缺血12 h后進行神經(jīng)學(xué)評分，腦梗死面積測定，腦組織病理觀察，腦組織IL—10及血清TNF—α、IL—1β含量測定。 二、全腦缺血再灌注損傷試驗：Wistar大鼠150只，雌雄兼用，體重180～220g，隨機分為5組，即空白對照組、假

7、手術(shù)組、缺血再灌注損傷模型組、TNHH組及溶媒對照組。實驗室條件適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，制備全腦缺血再灌注模型，于再灌注1h后尾靜脈注射給藥，間隔8h后同法再次給藥；第二天給藥時間與第一天對應(yīng)，各組給予的藥品及劑量與局灶性腦缺血損傷試驗相同。再灌注后48 h處死大鼠。進行腦組織病理學(xué)檢查，檢測腦組織含水量，腦組織MDA含量、SOD與MPO活性，TNF—α及IL—10水平，血清IL—1β和TNF—α水平。 結(jié)果：TNHH6.75mg/k

8、g/次靜脈注射給藥，可減輕大鼠局灶性腦缺血損傷的程度，使腦缺血梗死面積減小，神經(jīng)行為學(xué)評分降低，腦組織病理學(xué)改變緩解，并顯著降低腦組織白介素10（IL—10）及血清腫瘤壞死因子α（TNF—α）、白介素1β（IL—1β）水平。TNHH還能明顯減少全腦缺血—再灌注損傷模型大鼠腦組織含水量，改善缺血及再灌注損傷所致的腦組織病理形態(tài)學(xué)改變，顯著降低大鼠腦組織的丙二醛（MDA）含量、降低髓過氧化物酶（MPO）的活性，并明顯升高超氧化物歧化酶（SO