重組人粒細(xì)胞集落刺激因子對腦缺血的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、研究目的：缺血性腦血管病是嚴(yán)重威脅人類健康的常見病和多發(fā)病，治療方法頗多，但臨床療效多不理想。如何降低該病的發(fā)病率及致殘率，一直是世界上研究的熱點(diǎn)之一。已有文獻(xiàn)報(bào)道重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(rhG-CSF)對腦缺血有保護(hù)作用，但其詳盡作用機(jī)制、療效、用藥時(shí)機(jī)、劑量及毒副作用等均未闡明。本實(shí)驗(yàn)采用腦缺血再灌注模型和局灶性腦缺血模型，多角度研究rhG-CSF介導(dǎo)的自身骨髓干細(xì)胞治療急性腦缺血的療效和作用機(jī)制，為最終應(yīng)用于臨床提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

2、 研究方法：(1) 建立3組局灶性腦缺血再灌注模型。將雄性健康沙土鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組1組、對照組1組和假手術(shù)對照組1組。實(shí)驗(yàn)組1組在腦缺血再灌流后30分鐘腹腔注射rhG-CSF60 μg/kg，對照組1組在復(fù)制模型后30分鐘腹腔注射與實(shí)驗(yàn)組1組等量生理鹽水，假手術(shù)對照組1組除不夾閉兩側(cè)頸總動(dòng)脈外，其他實(shí)驗(yàn)步驟同對照組1組。在做模后24h、48h和1周三個(gè)不同時(shí)段將3組沙土鼠分別處死取腦切片，進(jìn)行尼氏染色和免疫組化觀察。(2)用光化學(xué)

3、法制作大鼠局灶性腦缺血模型。成年雄性健康SD大鼠隨機(jī)分為對照組2組、實(shí)驗(yàn)組2組、實(shí)驗(yàn)組3組和假手術(shù)對照組2組。實(shí)驗(yàn)組2組和實(shí)驗(yàn)組3組大鼠制模前7天給予rhG-CSF腹腔注射，劑量分別為60 μg/kg、120 μg/kg：對照組2組和假手術(shù)對照組2組給予與實(shí)驗(yàn)組2組及實(shí)驗(yàn)組3組等量生理鹽水。腦缺血后3h各組分別處死6只大鼠，測定腦組織超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量。腦缺血后24h各組分別處死6只大鼠，取腦行2，3，5

4、-氯化三苯四唑(TTC)染色，測量腦梗死體積。 結(jié)果：(1) 腦缺血再灌注后1周，實(shí)驗(yàn)組1組海馬本部CA<,1>區(qū)錐體細(xì)胞部分丟失，部分殘存；對照組1組海馬本部CA<,1>區(qū)錐體細(xì)胞大部分丟失，只有少量細(xì)胞殘存，零星散在分布：假手術(shù)對照組1組海馬本部CA<,1>區(qū)錐體細(xì)胞未見明顯丟失。(2)實(shí)驗(yàn)組1組術(shù)后24h，海馬區(qū)齒狀回可檢測到CD34<'+>單個(gè)核細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)組1組術(shù)后48h，海馬區(qū)齒狀回除有CD34<'+>單個(gè)核細(xì)胞浸潤外

5、，還存在呈錐形且?guī)в型黄鸬腃D34<'+>細(xì)胞，而CD34<'+>細(xì)胞主要分布于齒狀回顆粒細(xì)胞下層。實(shí)驗(yàn)組1組術(shù)后1周，海馬區(qū)齒狀回除有少量的CD34<'+>細(xì)胞外，還可見串珠樣CD34<'+>細(xì)胞。在以上三個(gè)時(shí)間點(diǎn)海馬本部未見CD34<'+>細(xì)胞。對照組1組和假手術(shù)對照組1組海馬本部及齒狀回均未見CD34<'+>細(xì)胞。(3)對照組2組大鼠局灶性腦缺血后腦組織內(nèi)SOD活性下降，實(shí)驗(yàn)組3組SOD活性比對照組2組高，有顯著性差異(P<0.0

6、5)。對照組2組大鼠局灶性腦缺血后腦組織內(nèi)MDA含量增高，實(shí)驗(yàn)組3組MDA含量比對照組2組低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(4)對照組2組腦梗死范圍較實(shí)驗(yàn)組2組和實(shí)驗(yàn)組3組大，實(shí)驗(yàn)組2組和實(shí)驗(yàn)組3組與對照組2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論： 1.rhG-CSF可減輕腦缺血再灌流后海馬CA<,1>區(qū)錐體細(xì)胞遲發(fā)性神經(jīng)元壞死；rhG-CSF可動(dòng)員骨髓干細(xì)胞進(jìn)入海馬，并進(jìn)一步分化為功能細(xì)胞，對腦缺血再灌注