巴戟天環(huán)烯醚萜質(zhì)量評價的研究.pdf

1、巴戟天為我國著名的“四大南藥”之一，《中華人民共和國藥典》2005年版一部收載的巴戟天來源于茜草科植物巴戟天MorindaofficinalisHow.的根，具補腎陽、強筋骨、祛風濕功效，臨床用于治療陽痿遺精、宮冷不孕、月經(jīng)不調(diào)、少腹冷痛、風濕痹痛、筋骨痿軟等癥。廣東歷來是巴戟天的道地產(chǎn)區(qū)，全國絕大部分的巴戟天產(chǎn)自廣東，另外，廣西、福建、海南也有少量栽培。 巴戟天含蒽醌、環(huán)烯醚萜、寡糖、多糖等化學成分，其中環(huán)烯醚萜具有較強的抗炎

2、鎮(zhèn)痛功效，但對以環(huán)烯醚萜成分作為質(zhì)控指標的研究還未見報道。本研究在多年來對巴戟天研究和巴戟天資源調(diào)查的基礎(chǔ)上，以環(huán)烯醚萜類化學成分為指標，對巴戟天的環(huán)烯醚萜類化學成分進行含量測定和指紋圖譜技術(shù)研究。現(xiàn)將研究結(jié)果概述如下： 第一部分文獻研究 查閱了大量的巴戟天藥材研究資源以及與本研究相關(guān)的資料，對巴戟天的本草考證、物種資料、栽培技術(shù)、化學成分、藥理作用、質(zhì)量控制等方面的研究及進展情況進行了總結(jié)。 第二部分實驗研究

3、 一、巴戟天的資源調(diào)查 對廣東、廣西、福建、海南的巴戟天進行了栽培情況、生態(tài)學和種質(zhì)資源調(diào)查，并收集了大量的巴戟天樣品。結(jié)果表明，巴戟天在廣東的栽培面積最大，在廣西、福建、海南只有少量栽培；巴戟天的生長受溫度、光照、水分和土壤的影響較大；巴戟天在廣東、廣西、福建和海南的種質(zhì)資源有較大差異，這些都影響了巴戟天的質(zhì)量。 二、巴戟天環(huán)烯醚萜質(zhì)量控制評價方法的研究 (一)水晶蘭苷的快速分離和制備 本研究建立

4、了巴戟天根中主要環(huán)烯醚萜類化學成分——水晶蘭苷的快速提取方法，即從巴戟天葉中提取水晶蘭苷。此方法避免了巴戟天根中多糖類物質(zhì)的干擾，方法簡便、快速。 (二)水晶蘭苷的HPLC含量測定 目的：研究巴戟天根中水晶蘭苷的提取方法；了解水晶蘭苷在巴戟天中的分布規(guī)律。 方法：采用HPLC法，色譜條件為KromalsilC18柱(150mm×4.6mm，5μm)。流動相：(1)提取方法：甲醇-0.4％磷酸水溶液(10∶90)；

5、(2)含量測定：甲醇-0.4％磷酸水溶液(0∶100→28.8∶71.2，15min)為流動相。流速1mL·min-1；檢測波長231nm；柱溫25℃。 結(jié)果與結(jié)論： 1.巴戟天根中水晶蘭苷的提取方法學考察 對水晶蘭苷的提取進行了系統(tǒng)的提取方法學考察，結(jié)果表明，用100ml的80％甲醇超聲提取2次，每次30min，水晶蘭苷的提取率最高。 2.不同生長期巴戟天中水晶蘭苷的含量測定 水晶蘭苷的含量受種

6、植時間的影響較大，即隨種植時間的增加而增加。2.5～3.5年、3.5～4.5年、4.5～5.5年間，巴戟天中水晶蘭苷含量，相對于上一年的增幅分別為73.05％、4.59％、18.49％。說明巴戟天從種植后至3.5年左右的時期是水晶蘭苷成分的快速積累期，在種植3.5年后，水晶蘭苷成分緩慢增加。 3.不同產(chǎn)地巴戟天中水晶蘭苷含量測定 野生巴戟天與栽培巴戟天中水晶蘭苷成分積累的規(guī)律：3個不同來源的野生巴戟天，其水晶蘭苷的含量普

7、遍偏低(含量分別為9.54±1.37、12.15±0.13、8.20±0.08)；在同一地區(qū)(廣西東興或廣東德慶)，栽培品中水晶蘭苷的含量普遍高于野生品。 不同產(chǎn)地巴戟天中水晶蘭苷含量的變化規(guī)律：從測定結(jié)果看，廣東種質(zhì)的德慶、岑溪、玉林巴戟天，產(chǎn)地不同，其水晶蘭苷的含量有一定差異；在相同生長年限的條件下，其含量隨緯度的變化而變化，即從東向西，樣品中水晶蘭苷的含量呈遞增趨勢。上述水晶蘭苷含量的規(guī)律性改變，說明巴戟天在引種后，其質(zhì)量

8、發(fā)生了改變。 本實驗采集到的樣品，生長期均為4～5年，大多數(shù)樣品中水晶蘭苷的含量，要比廣東省德慶縣規(guī)范化種植(GAP)基地3.5年生巴戟天樣品中水晶蘭苷的含量要高，這為巴戟天的質(zhì)量評價提供了一定的參考依據(jù)。 4.巴戟天不同炮制品中水晶蘭苷含量與生品比較有較大差異，生巴戟天、巴戟肉、鹽巴戟天、制巴戟天中水晶蘭苷的平均含量分別為13.92mg·g-1、9.10mg·g-1、9.21mg·g-1、12.86mg·g-1，巴戟天

9、炮制后水晶蘭苷的含量降低，說明巴戟天在經(jīng)蒸、煮等炮制工序?qū)Π完熘兴m苷的含量均有不同程度影響，且蒸法、鹽蒸法對其的影響更大。因此，應分別制訂巴戟天及其炮制品的質(zhì)量標準。 5.對巴戟天不同部位中水晶蘭苷的測定結(jié)果表明：不同產(chǎn)地(廣東、廣西)來源的巴戟天，根和葉均含有水晶蘭苷，且葉中水晶蘭苷的含量要大于根；除海巴戟果和羊角藤外，所有樣品都含有水晶蘭苷，其中以巴戟天的根、葉含量較高。因此，從巴戟天資源的開發(fā)和利用角度而言，巴戟天葉

10、中水晶蘭苷含量高，生長周期短，可以以巴戟天葉為原料，提取水晶蘭苷。 6.商品巴戟天中水晶蘭苷的含量差異很大，含量范圍從1.27～19.03mg·g-1不等，廣西南寧、廣西玉林、廣州清平商品巴戟天各樣品中水晶蘭苷含量的RSD分別為37.78％、18.00％和33.16％，說明上述藥市商品巴戟天的質(zhì)量參差不齊；河北安國樣品中水晶蘭苷含量較低；海南萬寧的野生樣品與清平市場上收集的野生樣品中水晶蘭苷的含量十分接近。如果以廣東省德慶縣巴戟

11、天規(guī)范化種植基地的4.5年生樣品中水晶蘭苷的含量為指標，則合格率僅為22.58％。說明大多數(shù)巴戟天商品，其生長年限均未達到4.5年，且質(zhì)量參差不齊。 另外，在購買樣品過程中，在廣州清平藥材市場購買到2批野生巴戟天(廣州清平8、10)，其外觀特征(大小、質(zhì)地、顏色等)與野生品極為相似。從含量測定結(jié)果來看，這2個樣品中水晶蘭苷的含量都偏低(分別為7.14±1.68mg·g-1和8.01±0.53mg·g-1)，與野生巴戟天中水晶蘭苷

12、含量(廣東德慶9.54±1.37mg·g-1，廣西東興12.15±0.13mg·g-1，海南萬寧8.20±0.08mg·g-1)偏低的情況相吻合。但這兩批樣品是否為真正的野生，還須結(jié)合其它化學成分及指紋圖譜才能確定。 (三)環(huán)烯醚萜指紋圖譜技術(shù)研究 目的：進行環(huán)烯醚萜指紋圖譜方法學研究；研究不同來源的巴戟天環(huán)烯醚萜類化學成分的HPLC指紋圖譜的差異，為巴戟天的質(zhì)量控制提供科學資料。 方法：采用HPLC法，色譜條件

13、為KromalsilC18柱(150mm×4.6mm，5μm)，甲醇-0.4％磷酸水溶液(0:100→58.30∶41.70，35min)為流動相；流速1mL·min-1；檢測波長231nm；柱溫25℃。 結(jié)果與結(jié)論： 1.巴戟天環(huán)烯醚萜色譜指紋圖譜和共有峰的建立 從巴戟天HPLC指紋圖譜中可分離出近40個色譜峰，經(jīng)比較10批規(guī)范化種植基地樣品的圖譜，從中選定7個共有峰作為可以構(gòu)成巴戟天環(huán)烯醚萜指紋圖譜的穩(wěn)定的特

14、征峰，測得其相對百分含量大于90％。為易于辨認和分析，將指紋圖譜分為3個區(qū)：主峰區(qū)(Ⅰ區(qū))——從圖譜10～17min的區(qū)域，主要包括特征峰1、2，是鑒別巴戟天是否為野生，以及真?zhèn)蔚闹匾獏^(qū)域；特征峰區(qū)(Ⅱ區(qū))——從圖譜17～23min的區(qū)域，主要包括峰3、峰4和峰5，本區(qū)是鑒別不同種質(zhì)、不同產(chǎn)地巴戟天的區(qū)域；指紋峰區(qū)(Ⅲ區(qū))——從圖譜23～35min的區(qū)域，包括峰6和峰。 2.對不同來源的樣品的指紋圖譜相似度計算表明：不同生長年限

15、、不同種質(zhì)、不同產(chǎn)地、不同炮制品指紋圖譜的相似度均大于0.94；巴戟天混偽品的相似度均小于0.94，因此可以利用指紋圖譜相似度分析，將巴戟天混偽品與正品區(qū)別開來。 3.不同來源的巴戟天在指紋圖譜主峰區(qū)(Ⅰ區(qū))、特征區(qū)(Ⅱ區(qū))和指紋區(qū)(Ⅲ區(qū))都有一定的區(qū)別，對比三個區(qū)的異同，可有效地鑒別不同來源(野生與栽培、不同來源、巴戟天混偽品)的樣品。 4.巴戟天指紋圖譜在炮制后指紋圖譜色譜峰數(shù)目發(fā)生了改變。峰2與峰3之間增加了幾個色