鴨源多殺性巴氏桿菌分離鑒定及感染雛鴨動(dòng)態(tài)病理學(xué)觀察.pdf

1、多殺性巴氏桿菌（Pasteurella multocida,P.m）是一種危害畜禽養(yǎng)殖業(yè)的常見(jiàn)菌，禽類(lèi)中鴨對(duì)其最為敏感。本研究通過(guò)對(duì)臨床分離到的一株多殺性巴氏桿菌的鑒定及藥敏試驗(yàn)，了解其耐藥情況；通過(guò)動(dòng)物回歸試驗(yàn)測(cè)定其毒力及不同接菌方式對(duì)其毒力的影響，并探討了 TNF-α和 IL-1β在致炎中的作用，以期對(duì)該病病理?yè)p傷機(jī)制的深入研究提供基礎(chǔ)資料，同時(shí)為該病臨床診斷和防控提供理論依據(jù)。主要工作：
　　1從湖北省武漢市周邊地區(qū)某鴨廠臨

2、床病例中分離到一株細(xì)菌，進(jìn)行生化鑒定，培養(yǎng)特征鑒定，16S rDNA鑒定，藥敏試驗(yàn)和動(dòng)物回歸試驗(yàn)。結(jié)果顯示該菌屬于Fo型多殺性巴氏桿菌（命名為PM株）。該分離株對(duì)磺胺類(lèi)，大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)等多種抗生素敏感；16S rDNA部分序列與Genbank公布的牛源、羊源、豬源和雞源多殺性巴氏桿菌16S rDNA序列同源性均在99％，與溶血性巴氏桿菌同源性在93%以下。提示不同物種來(lái)源多殺性巴氏桿菌的16S rDNA序列較為保守，但仍存在個(gè)別位點(diǎn)突變現(xiàn)象

3、。
　　2比較了灌胃、皮下接菌、支氣管接菌和腳蹼接菌對(duì)雛鴨毒力的影響。皮下和支氣管接菌均對(duì)雛鴨表現(xiàn)出高毒力，腳蹼接菌毒力稍弱，但采用高劑量0.5mL（2×105CFU/mL）進(jìn)行灌胃未見(jiàn)雛鴨發(fā)病。結(jié)果表明多殺性巴氏桿菌不通過(guò)消化道途徑感染雛鴨。
　　3復(fù)制雛鴨感染多殺性巴氏桿菌動(dòng)物模型。用0.5mL（約4×102CFU/mL）菌液經(jīng)腳蹼感染18日齡櫻桃谷鴨，能引起雛鴨產(chǎn)生以急性出血性敗血癥為主的典型禽霍亂癥狀。發(fā)病雛鴨臨床特

4、征以食欲廢絕，飲欲升高，畏寒，無(wú)法直立行走，口鼻流涎為主。病程持續(xù)1~3d。臨床癥狀明顯期為接菌后第10h；第24h開(kāi)始零星死亡，至48h達(dá)到高峰；48h后發(fā)病率降低，72h后癥狀緩解，采食飲水逐漸恢復(fù)。結(jié)果說(shuō)明多殺性巴氏桿菌強(qiáng)毒株感染雛鴨后病程呈“一過(guò)性”經(jīng)過(guò)，臨床表現(xiàn)主要以呼吸道損傷為主。
　　4分別在感染后第4h、10h、24h、40h、49h、7d進(jìn)行剖殺，進(jìn)行動(dòng)態(tài)組織病理學(xué)觀察。結(jié)果顯示肝臟在感染后4h出現(xiàn)水泡變性，24

5、h出現(xiàn)凝固性壞死灶；肺臟在10h出現(xiàn)明顯淤血和出血及異嗜性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，40h出現(xiàn)壞死灶；胸腺在4h出現(xiàn)“星空狀”淋巴細(xì)胞缺失；脾臟在24h呈空泡狀并伴有大量異嗜性粒細(xì)胞浸潤(rùn)；法氏囊在40h淋巴濾泡內(nèi)淋巴細(xì)胞壞死。結(jié)果表明P.m可以導(dǎo)致多個(gè)器官產(chǎn)生炎癥，早期損傷器官為肝臟、肺臟、大腦和胸腺；P.m可以對(duì)免疫器官造成嚴(yán)重?fù)p傷，且最先激活機(jī)體細(xì)胞免疫。
　　5白細(xì)胞計(jì)數(shù)顯示在8h、10h、17h和24h接菌組異嗜性粒細(xì)胞/淋巴細(xì)胞比值高

6、于空白組，40h后無(wú)明顯差異；ELISA法測(cè)試血清中 TNF-α含量，結(jié)果顯示2h、4h、6h、10h、11h、17h、24h、40h、48h接菌組和空白組血清TNF-α含量均差異不顯著（P>0.05）；利用 SABC免疫組化法對(duì)接菌組脾臟、肺臟和法氏囊進(jìn)行IL-1β染色，結(jié)果顯示法氏囊和肺臟中IL-1β陽(yáng)性信號(hào)IOD值均極顯著高于空白組（P<0.01），脾臟 IOD值則顯著高于空白組（P<0.05）。結(jié)果顯示IL-1β參與致炎，但未觀